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荧光分析活性氧在血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖中的作用

王立英  苏海燕  王璇  周艳  杨世杰  
【摘要】:应用荧光分析方法探讨活性氧(Reactive oxygen species,ROS)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞(Myofibroblasts,myoFbs)增殖中的作用。实验中采用胰酶消化法分离、培养原代新生大乳鼠myoFbs,10%胎牛血清培养,采用2~3代myoFbs,并随机分为正常对照组、AngⅡ处理组、N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)干预组,培养12、24和36 h后,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5)-Dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-diphcnyt-etrazoliumromide,MTT)法测定myoFbs的增殖率;硝酸酶还原法检测myoFbs产生羟自由基(·OH)的量;利用荧光探针DCFH-DA分析检测myoFbs中ROS的水平;免疫细胞化学染色法及荧光共聚焦测定p-PKCα的表达及膜转位。结果显示一定浓度的AngⅡ作用myoFbs 24 h时myoFbs增殖率明显增加(η值(%)为117.05);并诱导myoFbs产生大量ROS,其中myoFbs增殖率越高,·OH的含量(94.53±1.68)越高;免疫细胞化学染色及荧光共聚焦可见,AngⅡ能明显促进pPKCα的表达及膜转位(与对照组比较p0.01或p0.001);NAC(10~(-4)mol/L)可抑制AngⅡ引起myoFbs的增殖(OD值为0.357±0.13),减少myoFbs内ROS及·OH的量(75.57±1.48),抑制p-PKCα的表达及膜转位。

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