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96孔板法用于高通量血管紧张素转化酶抑制剂体外检测

骆琳  丁青芝  马海乐  
【摘要】:为在体外迅速检测血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)的抑制活性,选用96孔板,以呋喃丙烯酰三肽(FAPGG)为模拟底物,通过检测血管紧张素转化酶(ACE)酶解FAPGG生成N-[3-(呋喃)丙稀醇酰]-2-苯丙氨酸(FAP)和双甘氨肽(GG)后340 nm处吸光值的下降衡量ACE的活性,采用加入ACEI前后ACE的活性变化衡量ACEI的活性。考察了不同缓冲体系、Cl-浓度、ACE酶活性(ACE酶浓度)、缓冲体系的pH值等对上述检测模型反应体系的影响,建立了高通量降血压肽活性体外检测方法,本方法最多可同时检测96个样品的ACE抑制活性,上机分析时间仅需10 s。不同批次活性平行测定的相对标准偏差均小于0.001%,p=0.6670.05,各测定结果无显著差异,重现性好,精密度较高。采用本方法测定了商品血管紧张素转化酶抑制剂Captopril的IC50值为16.19 nmol/L,与文献报道的测定结果一致。

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