果树R基因同源序列克隆的初步研究

【摘要】：用 2对根据已知植物抗病基因 (R基因 )编码的蛋白质的NBS保守区而设计的特异简并引物 ,对荔枝、龙眼、芦柑、柚子及银杏的基因组DNA进行体外扩增。其中一对引物 (P1/P2 )在荔枝、龙眼、芦柑和柚子中获得的扩增产物均表现为一条大小约 50 0bp的明亮谱带 ,而银杏扩增产物的亮带则在约 750bp处 ,且弥散在 40 0～ 10 0 0bp之间。另一对引物在荔枝、龙眼、芦柑和柚子中没有特异扩增带 ,而在银杏中获得了一条 40 0～ 60 0bp的较亮的宽带。将荔枝、龙眼、芦柑和柚子的 50 0bp特异扩增带以及银杏的 40 0～ 60 0bp条带回收克隆 ,并分别筛选几类阳性克隆进行测序。共获得 15个片段的序列。经比较发现 ,来自荔枝、龙眼、芦柑和柚子的 12个片段均属于NBS -LRR类抗病基因同源序列 (RGA) ,与已知R基因相应区段的氨基酸序列的一致性为 15 5%～47 1% ;而 3个来自银杏的片段均不是RGA ,其中 1个与反转录酶有较高的同源性 ,另 2个在GeneBank中没有找到同源序列。该结果显示 ,应用同源扩增技术克隆果树RGA是可行的 ,但银杏作为古老的裸子植物 ,其抗病基因的结构与现代物种可能有很大差异