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苏俄苹果酵母双杂交cDNA文库的构建与评价

段豪  赵绪生  钟敏  胡同乐  王树桐  张瑜  张珣  王亚南  曹克强  
【摘要】:以苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)组培苗为试材,构建了以真核表达载体pGADT7为基础的苹果酵母双杂交cDNA文库。通过异硫氰酸胍法提取总RNA,Oligotex-dT30SupermRNA Purification Kit分离纯化mRNA,利用SMART法反转录合成双链cDNA(dscDNA),酶切纯化后的dscDNA与库载体pGADT7连接电转大肠杆菌,经涂板检测,初始文库滴度为2.67×105 cfu/mL,库容量为4.0×106 cfu,随后将文库进行了百万扩增,扩增文库滴度为1.0×108 cfu/mL,库容为1.5×1010 cfu,在文库中随机挑取46个克隆,利用PCR方法测得文库插入片段75%大于1kb,重组率为100%,文库质量较高,符合文库构建的标准,为后续苹果分子生物学研究以及病毒与寄主互作研究奠定了基础。

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