收藏本站
收藏 | 投稿 | 论文排版

免疫相关GTP结合蛋白2的亚细胞定位分析

覃鸿泉  郑幽  王嫚娜  张峥嵘  牛祖彪  马骊  孙强  黄红艳  王小宁  
【摘要】:目的:对免疫相关GTP结合蛋白2(GTPase of immunity-associated protein 2,GIMAP2)进行亚细胞定位分析,为深入研究GIMAP2蛋白的功能奠定基础。方法:使用国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库查询获取GIMAP2的蛋白序列,再利用生物信息学在线分析工具对GIMAP2蛋白的跨膜结构、核定位信号(nuclear localization signal,NLS)、核输出信号(nuclear export signal,NES)及亚细胞定位进行分析预测。采用PCR技术扩增GIMAP2基因片段,并插入至p QCXIP-mCherry-N1表达载体,用氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆。测序正确的重组质粒p QCXIP-GIMAP2-mCherry经过提取、纯化步骤后,与逆转录病毒包装质粒VSVG、Gag/Pol在脂质体介导下共同转入HEK293FT细胞中进行病毒包装。转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436。使用免疫荧光染色方法检测内、外源性GIMAP2在MDA-MB-436胞内表达定位情况。使用绿色荧光化学染料分别标记稳定表达GIMAP2-mCherry融合蛋白的MDA-MB-436活细胞中的线粒体、内质网、脂滴,在超分辨率显微镜N-SIM下观察其与红色荧光的GIMAP2蛋白的定位情况。结果:生物信息学分析数据显示,由337个氨基酸组成的GIMAP2蛋白在羧基端可能有2个跨膜螺旋结构,其中跨膜螺旋含预期氨基酸数为40~41个,紧随跨膜螺旋结构之后的蛋白结构朝细胞质侧;羧基端第279~281位氨基酸有NES但无NLS;可能定位在内质网。测序结果表明,成功构建表达载体p QCXIP-GIMAP2-mCherry。荧光染色结果证实,GIMAP2-mCherry融合蛋白成功在MDA-MB-436细胞内表达,并与内源性GIMAP2定位一致,分布于内质网和脂滴。结论:免疫相关GTP结合蛋白2定位于内质网和脂滴,可能与脂代谢相关。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 魏辉俊;类胰岛素生长因子结合蛋白[J];国外医学.内分泌学分册;1994年04期
2 罗竞春,郭慕依,张秀荣;玻璃结合蛋白及其受体在病变肾组织中的表达及其意义[J];上海医科大学学报;1997年04期
3 成军;;新基因丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6的发现和研究——献礼非酒精性脂肪性肝病[J];中国肝脏病杂志(电子版);2019年04期
4 孙花;罗彬;莫发荣;何少健;;人类驱动结合蛋白及其与某些疾病的相关性[J];生命的化学;2007年05期
5 张岩;梅柱中;;RNA结合蛋白HuR的研究进展[J];广东医学;2012年24期
6 扈玉婷;徐东刚;马百坤;王嘉玺;王瑞林;;中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析[J];医学研究通讯;2000年11期
7 吴光玉,赵升皓;淋巴细胞中钙调素结合蛋白的研究[J];中国免疫学杂志;1990年05期
8 范梦夏;乔洁;;黄体生成素受体mRNA结合蛋白的研究进展[J];上海交通大学学报(医学版);2015年06期
9 后文俊,马鹏程;维A酸结合蛋白的作用及其调节[J];国外医学.皮肤性病学分册;2005年05期
10 刘祥莉;张福成;王要军;;远端上游元件结合蛋白1的生物学功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2017年09期
11 贺翔;银兴峰;张留辉;阳小燕;孙雪松;;利用固定化金属亲和层析和质谱技术鉴定化脓性链球菌铜结合蛋白[J];微生物学通报;2010年11期
12 刘玉峰;Mobilferrin——一种新的铁结合蛋白[J];国外医学.输血及血液学分册;1997年04期
13 傅奕,赵惠仁,裴冬生;中国人IL-18结合蛋白cDNA的克隆和序列分析[J];免疫学杂志;2000年04期
14 李媛媛;白春艳;吴潇;潘玉春;;促肾上腺皮质激素释放激素结合蛋白基因的研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2008年02期
15 马谊,李尚为;胰岛素样生长因子及其结合蛋白在围着床期的作用[J];职业卫生与病伤;2001年02期
16 沈煜,陆瑞良,何开玲;鸡胚胆囊收缩素结合蛋白的纯化及性质[J];上海医科大学学报;1999年01期
17 陈受霓;病毒结合蛋白——细胞因子免疫测定的抗体替代物[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2003年01期
18 杜红玲;甲基CpG结合蛋白对基因转录的调控[J];国外医学(分子生物学分册);2001年02期
19 傅奕,赵惠仁,陆梁;人IL-18结合蛋白cDNA的克隆及其逆转录病毒载体的构建[J];徐州医学院学报;2001年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 唐蕾;徐磊;;脱镁叶绿酸结合蛋白的分离纯化与抑菌性研究[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
2 孙岩;吴雄飞;刘宏;彭侃夫;;人单核细胞表面晚期氧化蛋白产物结合蛋白的分离[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
3 吴媛;洪源;成军;陶明亮;楚雍烈;;丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白1基因的克隆化与序列分析[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
4 武会娟;张丽娟;蓝贤勇;罗军;成军;伦永志;郭江;毛羽;;应用抑制性消减杂交技术筛选HBeAg蛋白结合蛋白E36的上调基因[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
5 宋春娇;赵永娟;陈凤;郑德先;刘彦信;;ERBIN是HTLV-1 TAX新的结合蛋白[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
6 孙益;葛霁光;;人睫状神经营养因子和可溶性人睫状神经营养因子受体的融合蛋白的表达[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 庄申甜;李强;雷晓光;王初;;胆酸结合蛋白的化学蛋白质组学分析[A];中国化学会第30届学术年会摘要集-第四十三分会:质谱分析[C];2016年
8 黄燕萍;成军;王琳;刘妍;魏红山;洪源;张树林;;应用酵母双杂交技术筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2的结合蛋白编码基因[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
9 黄燕萍;成军;王琳;杨瑗;白桂芹;杨倩;刘敏;蔺淑梅;刘妍;张树林;;应用酵母双杂交技术筛选人肝细胞中与丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2结合蛋白的编码基因[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年
10 孙翠莲;潘建平;;sflk1-IFN-γ融合蛋白的分离与纯化[A];浙江省免疫学会第六次学术研讨会论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙岩;人单核细胞表面晚期氧化蛋白产物结合蛋白的分离[D];第三军医大学;2005年
2 金旭;冠状病毒N7甲基转移酶甲基化核苷酸GTP的特性研究[D];武汉大学;2013年
3 潘婷婷;丙型肝炎病毒基因组3'末端非编码区结合蛋白调控HCV复制的研究[D];复旦大学;2008年
4 王海波;m_4AchR-Gilα融合蛋白的表达及功能的研究[D];中国医科大学;2004年
5 蒋卫民;HIV-1 p24和gp41融合基因载体的构建以及融合蛋白在原核细胞中的表达[D];复旦大学;2004年
6 张意;酵母表达的MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的生物学功及其相关机制研究[D];第二军医大学;2005年
7 王宣军;BCG热休克蛋白65-HER2多表位融合蛋白[D];吉林大学;2003年
8 孙兆明;p33ING1b核定位信号肽入核引导作用及其融合蛋白表达纯化的研究[D];天津医科大学;2006年
9 石炳兴;靶向溶栓抗凝双功能融合蛋白的构建表达及在血栓疾病治疗中的应用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
10 孙强明;rhuGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及生物学活性研究[D];中国协和医科大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈聪;基于自组装光交联多肽探针和生物质谱鉴定组蛋白修饰结合蛋白的研究[D];天津医科大学;2019年
2 龚文华;肾腺苷脱氨酶及其结合蛋白的分离纯化和性质研究[D];江西医学院;2001年
3 孙见飞;不同分化阶段树突状细胞骨架结合蛋白表达变化的研究[D];贵州医科大学;2016年
4 沈伊勤;单克隆抗体聚体与碎片的去除与纯度检测方法的优化[D];上海交通大学;2018年
5 张素婷;融合蛋白ΔA146Ply-SP0148经黏膜途径免疫对小鼠肺炎链球菌感染的保护效应研究[D];遵义医科大学;2019年
6 周玲;预防宫颈癌的多价HPV L2疫苗的研究[D];天津医科大学;2013年
7 余佩佩;TriTH/Cripto-1_(29-164)/TSP50_(114-349)融合蛋白的原核表达纯化[D];东北师范大学;2016年
8 杜娟;APOBEC3A-HBc融合蛋白的克隆表达及其抗病毒作用研究[D];中国人民解放军空军军医大学;2018年
9 邵佳;人免疫缺陷病毒包膜蛋白第三可变区V3融合蛋白的免疫原性分析及中和单抗的筛选[D];厦门大学;2017年
10 林家帅;具有靶向功能的双效融合蛋白构建研究[D];辽宁大学;2014年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 常丽君;线粒体融合蛋白2决定细胞生死[N];科技日报;2013年
2 通讯员 沈季 记者 张兆军;抗肿瘤融合蛋白进入临床试验[N];科技日报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978