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重组人肿瘤坏死因子α对人脂肪基质细胞体外成骨向分化的影响

余日月  曾百进  刘云松  周永胜  
【摘要】:目的:探讨一定浓度的重组人肿瘤坏死因子α(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)对人脂肪基质细胞(human adipose-derived stromal cells,hASCs)体外成骨向分化的影响。方法:采用第4代hASCs,根据培养基的不同分为4组:(1)基础培养[DMEM+10%FBS(体积分数)+100 U/mL青霉素+100 mg/L链霉素];(2)基础培养+10μg/L rhTNF-α;(3)成骨向诱导培养(基础培养+100 nmol/L地塞米松+50μmol/L维生素C+10 mmol/Lβ-甘油磷酸);(4)成骨向诱导培养+10μg/L rhTNF-α。各组每3天更换相应培养基。在第3、7、14天和第21天进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)定量检测;在第14和21天进行钙结节染色和矿化沉积定量检测;并用反转录PCR检测成骨向诱导组核心结合因子α1(core-binding factorα1,Cbfa1)、Osterix(Osx)和骨钙素(osteocalcin,OC)等成骨相关基因的表达;在成骨向诱导的第3天,用实时定量PCR检测rhTNF-α对hASCs成骨相关基因表达的影响。结果:对碱性磷酸酶定量检测,在成骨向诱导的第14天(3.527±0.415 vs.2.345±0.354,P0.01)和第21天(3.106±0.105 vs.2.442±0.163,P0.01),10μg/L的rhTNF-α可以促进其表达;同样对于矿化沉积检测,在成骨向诱导的第14天(2.896±0.173 vs.0.679±0.173,P0.01)和第21天(2.231±0.233vs.1.729±0.229,P0.01),10μg/L的rhTNF-α也促进其表达;反转录PCR和实时定量PCR也表明rhTNF-α可以促进Cbfa1,Osx和OC的表达。结论:10μg/L的rhTNF-α可以促进成骨向诱导的hASCs体外成骨向分化,并可以促进成骨相关基因Cbfa1、Osx和OC的表达。

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