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N-乙酰半胱氨酸对尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的作用及其机制

崔磊华  侯玉帛  苏畅  李明贺  聂鑫  
【摘要】:目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对尼古丁诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,采用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0和7.5 mmol·L~(-1))尼古丁诱导MC3T3-E1细胞损伤,采用MTT法检测各组MC3T3-E1细胞增殖活性,并确定尼古丁半数抑制浓度(IC_(50))。根据IC_(50)值将MC3T3-E1细胞分为对照组、尼古丁组和尼古丁+不同浓度(2.5、5.0和7.5 mmol·L~(-1)) NAC组,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,以确定NAC最适作用浓度。将细胞分为对照组、尼古丁(4.25 mmol·L~(-1))组、NAC(5.0 mmol·L~(-1))组和尼古丁(4.25 mmol·L~(-1))+NAC (5.0 mmol·L~(-1))组,采用MitoSOX荧光染色法检测各组细胞中线粒体来源活性氧簇(mitoROS)水平,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,并计算Bax/Bcl-2比值。结果:与0 mmol·L~(-1)尼古丁组比较,不同浓度尼古丁组细胞增殖活性明显降低(P0.05),且呈浓度依赖性。尼古丁的IC_(50)值为(4.25±0.03) mmol·L~(-1)。与对照组比较,尼古丁组细胞增殖活性明显降低(P0.05);与尼古丁组比较,尼古丁+不同浓度NAC组细胞增殖活性明显升高(P0.05),尼古丁+5.0 mmol·L~(-1)NAC组细胞增殖活性升高最明显。与对照组比较,尼古丁组细胞中mitoROS水平明显升高(P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.05),细胞中Bax/Bcl-2比值明显升高(P0.05);与尼古丁组比较,NAC组和尼古丁+NAC组细胞中mitoROS水平明显降低(P0.05),细胞凋亡率明显降低(P0.05),尼古丁+NAC组细胞中Bax/Bcl-2比值明显降低(P0.05)。结论:NAC可缓解尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体氧化应激有关。

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