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Smac过表达增强氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

郭彩霞  李艳博  王斌  于洋  于永波  段军超  孙志伟  
【摘要】:目的:研究Smac过表达联合氯化镉(CdCl2)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为以Smac为基础的肿瘤基因治疗以及镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据。方法:实验共设立5组,分别为对照组、pcDNA3.1+组、pcDNA3.1+-hSmac组、CdCl2组以及CdCl2联合Smac组。对照组细胞不进行细胞转染、不染毒;pcDNA3.1+和pcDNA3.1+-hSmac组细胞采用脂质体介导的方法分别转染空载体pcDNA3.1+和携带Smac基因的重组质粒pcDNA3.1+-hSmac;CdCl2组给予不同浓度(10、20和30μmol.L-1)CdCl2;CdCl2联合Smac组细胞首先将pcDNA3.1+-hSmac转染入SMMC-7721,然后给予CdCl2处理。采用MTT法检测Smac过表达联合CdCl2对细胞增殖的影响,AO/EB法和AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果:MTT结果显示,与对照组比较,除空载体pcDNA3.1+组无统计学意义外,其余各组细胞A490值均降低,抑制率均明显增加,差异具有统计学意义(P0.01或P0.001);单纯CdCl2组细胞抑制率随剂量增加而显著上升;分别与相应的单纯CdCl2组和pcDNA3.1+-hSmac组比较,CdCl2联合Smac组细胞的抑制率明显升高(P0.001)。AO/EB染色荧光显微镜下观察显示,对照组细胞状态良好,而pcDNA3.1+-hSmac组、30μmol.L-1 CdCl2组及CdCl2联合Smac组细胞出现凋亡形态学改变,且后者最为明显。FCM结果显示,pcDNA3.1+-hSmac组细胞凋亡率增加,分别与对照组和pcDNA3.1+组比较,差异均具有统计学意义(P0.001)。CdCl2联合Smac组细胞凋亡率最高,显著高于单纯30μmol.L-1 CdCl2组(P0.001)。结论:CdCl2对SMMC-7721细胞具有毒性,可抑制细胞增殖,呈现剂量-效应关系,可诱导细胞凋亡。Smac过表达可抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,并可增强CdCl2对SMMC-7721细胞的增殖抑制和促凋亡作用。

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