收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达

王黎霞  张鹏  张建军  安健  
【摘要】:【目的】为了获得重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白。【方法】根据Genebank设计柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因特异引物,RT-PCR扩增该基因,经Blast与Genebank公布的该基因比对,而后构建该蛋白的真核表达载体pPICZαA/EtMIC4N,用毕赤酵母表达系统小规模表达该蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot对表达的蛋白鉴定,再以摇瓶的方式进行大规模表达。【结果】RT-PCR扩增获得柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因序列,大小为773 bp,经比较,与目的基因开放阅读框相似度99.5%,其中有4个碱基发生突变,1个gap。PCR证实成功构建真核表达载体,电转后的毕赤酵母用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot发现在上清中有45 kD的条带,说明成功表达该蛋白,且该表达系统可持续获得较高纯度的目的蛋白,以摇瓶的方式进行大规模表达,每升能够纯化到约10 mg的目的蛋白。【结论】毕赤酵母成功表达重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白,为该蛋白免疫原性的研究奠定基础。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 郑浩;张建武;袁世山;;猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及其E基因分析[J];中国兽医科学;2009年06期
2 王新秋;高艳;吴林林;刘少芬;刘丽丹;翁亚彪;林瑞庆;;不同来源柔嫩艾美耳球虫虫株微线体3基因的克隆和序列分析[J];中国畜牧兽医;2013年06期
3 战美娜;林青;于三科;宋军科;;柔嫩艾美耳球虫杨陵株3-1E基因的克隆与序列分析[J];西北农业学报;2010年05期
4 金岭梅,贾振全,赵其平,赵枝新;亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力研究[J];家畜生态;2003年02期
5 周炳绪;范治国;周丽娟;;鸡柔嫩艾美耳球虫石家庄株RT-PCR的随机扩增[J];中国畜牧兽医文摘;2016年09期
6 刘秀玲;赵耀光;;鸡柔嫩艾美耳球虫商丘地方株的分离与致病性试验[J];黑龙江畜牧兽医;2012年17期
7 刘帮兰;沈联华;陈秀梅;周淑媛;;鸡柔嫩艾美耳球虫病检疫[J];中国畜禽种业;2017年09期
8 吴音桃;;一起鸡柔嫩艾美耳球虫病的诊治[J];福建畜牧兽医;2016年02期
9 康明;陈刚;李英;李周清;;鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的分离与鉴定[J];安徽农业科学;2009年17期
10 赵长城;李培英;李福宝;李长政;修建;杨铁;;鸡柔嫩艾美耳球虫病的诊治报告[J];中国家禽;2007年02期
11 张守发;姜昌武;任秀兰;;95日龄小鸡群暴发柔嫩艾美耳球虫病的诊疗报告[J];延边农学院学报;1988年01期
12 王黎霞;刘新月;宋丽聪;赵晨璐;张建军;安健;;间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立[J];中国兽医杂志;2016年02期
13 周芳玉;王春凤;杨桂连;;柔嫩艾美耳球虫保护性抗原应用研究进展[J];中国兽药杂志;2015年09期
14 韩春周;费陈忠;于奕峰;张越;刘珊珊;薛飞群;;纳川珠利对鸡柔嫩艾美耳球虫病的防治效果研究[J];中国家禽;2011年06期
15 郭兵;王海凤;庞春酉;孙秀梅;许丽;刘荣欣;;雏鸡感染柔嫩艾美耳球虫对血清中抗氧化物酶产生的影响[J];河北北方学院学报(自然科学版);2010年04期
16 王承民;何宏轩;秦建华;姚四新;杭柏林;梁美兰;郑素玲;;几种中草药复方制剂抗鸡柔嫩艾美耳球虫的研究[J];安徽农业科学;2006年10期
17 孟新宇,赵枝新,赵其平,金岭梅;天然植物性抗柔嫩艾美耳球虫微粉制剂的效力试验[J];中兽医医药杂志;2005年03期
18 张伟信,张西臣,李建华,赵权,尹继刚,杨举,田宗成;应用RAPD技术对鸡柔嫩艾美耳球虫不同地理株的多态性研究[J];吉林农业大学学报;2003年02期
19 金岭梅 ,孟新宇 ,赵枝新 ,赵其平 ,王米 ,钟允安;抗柔嫩艾美耳球虫植物性制剂效力筛选试验[J];中国饲料;2003年23期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 王青杰;王璐;朱顺海;韩红玉;赵其平;于钰;梁珊珊;余水兰;王海霞;黄兵;董辉;;柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚成纤维细胞差异蛋白的筛选及特性的初步研究[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
2 胡俊菁;戚南山;吕敏娜;吴彩艳;李娟;林栩慧;蔡海明;Mudassar Mohiuddin;于林增;肖文婉;张健騑;廖申权;孙铭飞;;柔嫩艾美耳球虫GDH定点突变体构建及其重组表达[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
3 王海霞;谢雨翔;陈婷;刘桂玲;朱顺海;董辉;赵其平;黄兵;韩红玉;;柔嫩艾美耳球虫耐药株与敏感株差异基因筛选及初步鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
4 李文宇;王茗悦;徐立新;严若峰;李祥瑞;宋小凯;;柔嫩艾美耳球虫侵入部位特异性关键分子及其受体研究[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
5 赵宁宁;李宏梅;张晓;赵孝民;;柔嫩艾美耳球虫伴侣分子2(EtCCT2)的鉴定及功能初步研究[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
6 戚南山;;莫能霉素诱导柔嫩艾美耳球虫自噬介导虫体程序性死亡的作用机制研究[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
7 孙铭飞;廖申权;戚南山;吕敏娜;吴彩艳;李娟;林栩慧;蔡海明;胡俊菁;Mudassar Mohiuddin;于林增;肖文婉;张健騑;;柔嫩艾美耳球虫代谢谱分析及新型抗球虫药物的挖掘[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第一届青年科学家学术论坛摘要集[C];2019年
8 周变华;薛飞群;王霄旸;;地克珠利抗鸡柔嫩艾美耳球虫消减cDNA文库的构建[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年
9 安健;汪明;李宁;樊宝良;;柔嫩艾美耳球虫不同虫株的mRNA差异显示[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
10 刘新月;王黎霞;宋丽聪;赵晨璐;张建军;安健;;间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会论文集[C];2015年
11 刘利利;费陈忠;薛飞群;张可煜;张丽芳;王霄旸;王米;郑文丽;肖隧;;沙咪珠利对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会论文集[C];2015年
12 李佩国;张香斋;李蕴玉;贾青辉;;复方中草药对感染柔嫩艾美耳球虫肉仔鸡血清中尿酸、肌酐的影响[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
13 陈婷;刘桂玲;黄兵;赵其平;董辉;朱顺海;赵焕之;王璐;李志行;韩红玉;;柔嫩艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶特性初步研究[A];第十一届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会摘要集[C];2018年
14 李佩国;张香斋;李蕴玉;贾青辉;;复方中草药对感染柔嫩艾美耳球虫的肉仔鸡血清中若干抗氧化指标的影响[A];全国动物生理生化第九次学术交流会论文摘要汇编[C];2006年
15 李建梅;刘梅;沈欣悦;程旭;殷建玫;尤素兰;苏一军;戴亚斌;;22个品种鸡对柔嫩艾美耳球虫的易感性研究[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
16 马卫娇;韩红玉;黄兵;姜连连;董辉;程军;赵其平;朱顺海;曾艳波;;柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因的初步研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
17 韩红玉;黄兵;林矫矫;赵其平;董辉;姜连连;徐梅倩;朱顺海;;柔嫩艾美耳球虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及免疫原性分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
18 张伟;王建民;汪明;;应用cDNA阵列技术分析鸡柔嫩艾美耳球虫抗药性[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
19 刘文江;欧阳五庆;黄兵;韩红玉;赵其平;;柔嫩艾美耳球虫耐药株蛋白质差异比较[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
20 孟令慧;刘义伟;蒋禄峰;秦建华;赵月兰;包永占;;石家庄地区鸡柔嫩艾美耳球虫对5种药物的耐药性研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陆慧君;猪血凝性脑脊髓炎病毒的分离鉴定及其受体的筛选[D];吉林大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 霍晨阳;柔嫩艾美耳球虫谷氨酸脱氢酶基因的克隆、表达与功能分析[D];华南农业大学;2018年
2 易永萍;柔嫩艾美耳球虫临床分离株生物学特性研究[D];华南农业大学;2018年
3 周雪;鸡柔嫩艾美耳球虫钙结合蛋白EtCaBP免疫原性研究[D];山东农业大学;2019年
4 张海朝;鸡柔嫩艾美耳球虫多聚体疫苗EtDLC8a-GST-MIC2的构建与免疫保护效果的评价[D];山东农业大学;2019年
5 陈艳红;柔嫩艾美耳球虫S07-IL-2与NA4-IL-2重组酵母蛋白的表达及其免疫效果评价[D];吉林农业大学;2019年
6 王晶;柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)不同地理株杂交虫株(F_2)弱毒苗的制备及初步应用[D];吉林农业大学;2019年
7 赵焕之;柔嫩艾美耳球虫CDPK3互作蛋白的筛选及两个蛋白特性的初步研究[D];中国农业科学院;2019年
8 闫艳娟;柔嫩艾美耳球虫AMA-1、SO7基因的真核表达及免疫原性研究[D];河北科技师范学院;2019年
9 刘桂玲;柔嫩艾美耳球虫耐药相关基因的分析鉴定[D];上海师范大学;2019年
10 李志行;柔嫩艾美耳球虫外泌体的分离与鉴定及泛素蛋白功能初步研究[D];上海师范大学;2019年
11 王璐;柔嫩艾美耳球虫感染鸡胚成纤维细胞差异蛋白的筛选及特性研究[D];中国农业科学院;2019年
12 王旭;柔嫩艾美耳球虫AMA1与RON2互作的鉴定及其阻断剂的虚拟筛选[D];吉林大学;2018年
13 杜义明;柔嫩艾美耳球虫TA4-IL-2重组DNA疫苗的研制及安全性评价[D];吉林大学;2018年
14 王安源;癸氧喹酯与青蒿素抗鸡柔嫩艾美耳球虫的作用研究[D];扬州大学;2018年
15 陈婷;柔嫩艾美耳球虫耐药相关基因特性初步研究及耐药株与敏感株全基因组重测序分析[D];中国农业科学院;2018年
16 赵丽娟;中药复方制剂对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫的疗效研究[D];吉林农业大学;2018年
17 祝学珍;中草药复合制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫感染的治疗效果研究[D];吉林农业大学;2018年
18 沈琪琦;载Zn~(2+)、Cr~(3+)凹凸棒粘土的制备及其对鸡柔嫩艾美耳球虫病的防治效果研究[D];南京农业大学;2015年
19 吕凌;柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4互作蛋白的筛选与验证[D];上海师范大学;2018年
20 刘晓丽;柔嫩艾美耳球虫糖基转移酶GPT和ppGalNAc-T2基因克隆及表达动态分析[D];甘肃农业大学;2017年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978