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大叶栎ISSR扩增体系的优化

梁文汇  谭健晖  黄寿先  梁机  谢素平  刘光金  黄婷  周传明  
【摘要】:[目的]探讨影响大叶栎ISSR扩增效果的因素,建立大叶栎ISSR扩增的优化体系。[方法]以新嫩的大叶栎叶片为试材,采用改良CTAB法提取大叶栎叶片基因组DNA,并将DNA浓度稀释到30 ng/μl,采用单因素试验设计测试DNA模板、PCR缓冲液和TaqDNA聚合酶的用量以及底物dNTP终浓度和引物终浓度对ISSR扩增的影响。[结果]大叶栎的ISSR扩增的最优反应体系为:总体积20μl中含有DNA模板60 ng、PCR缓冲液10×buffer为2.0μl,底物dNTP终浓度为0.25 mmol/L,引物终浓度为0.3μmol/L,TaqDNA聚合酶为1 U。在该体系下,能够扩增出清晰、多态性高的条带,能够满足大叶栎种群ISSR多样性分析的要求。[结论]建立了大叶栎ISSR扩增的优化体系,为研究广西的大叶栎种群遗传多样性提供了技术基础。

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