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《重庆医科大学学报》 2003年01期
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结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达

陈全  骆旭东  蒋英  江山  朱道银  
【摘要】:目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa左右重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42%,用Western blotting证实其有良好的抗原性。经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92%的重组蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础。

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴丛梅,黄天华,吴德生,谢庆东,徐小虎;pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 熊小芳,黄天华,谢庆东,王晓梅,陈桂兰;精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达[J];癌变.畸变.突变;2005年03期
3 张学民,王金生;碱裂解法提取质粒DNA方法的改进[J];安徽大学学报(自然科学版);2000年04期
4 倪大虎,向太和,张盘娣,吴家道,杨剑波,贾士荣,余增亮;应用低能离子束将抗菌肽ShivaA基因导入恢复系明恢63的研究(简报)[J];安徽农业科学;2000年04期
5 许晓风,郁锋,杨启银,陈育如,彭荣淮,贺海生,王程辉;烟草工业下脚料综合利用研究(I)——抗菌成分的提取与抑菌效果测定[J];安徽农业科学;2003年02期
6 李雁楠;杨启银;陈育如;许晓风;彭荣淮;贺海生;王程辉;;烟草工业下脚料综合利用研究——抗虫成分的提取与抗虫效果测定[J];安徽农业科学;2006年02期
7 李建辉;金则新;李钧敏;;木荷ISSR反应体系的建立与优化[J];安徽农业科学;2006年19期
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10 周向东,刘凌志,钱桂生,黄桂君,陈杰;一条新的人肺腺癌耐药相关基因全长cDNA片段的克隆及序列分析[J];癌症;2002年04期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 杨志林;恶性胶质瘤相关新基因的筛选、克隆及其特性研究[D];第一军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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2 熊绍虎;人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达[D];第一军医大学;2000年
3 鲁峰;Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号传递及基因调控的实验研究[D];第一军医大学;2000年
4 马世东;非洲猪瘟的间接ELISA诊断试剂盒的研究[D];新疆农业大学;2000年
5 朱振洪;人内皮抑素在家蚕培养细胞和幼虫中表达的研究[D];浙江大学;2001年
6 赵辉;高胆固醇血症引起听力下降的分子机制研究[D];军医进修学院;2001年
7 王刚;应用抑制消减杂交筛选小鼠肾虚证差异表达基因[D];成都中医药大学;2001年
8 王崑;对内蒙古地区三个绵羊品种和一个杂交后代群体基因组DNA的RAPD分析[D];内蒙古农业大学;2001年
9 徐妙云;植物防御素Rs-AFP(R39)基因在河套蜜瓜中的表达[D];内蒙古农业大学;2001年
10 秦旭升;运用PCR-RFLP标记检测南瓜疫病菌[D];东北农业大学;2001年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 陈全,朱道银,骆旭东,蒋英,江山;结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因穿梭表达载体的构建及在BCG中的表达[J];中国人兽共患病杂志;2004年02期
【相似文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈全;结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建及重组CFP10-ESAT6融合蛋白的初步应用[D];重庆医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 贾平;戈登链球菌抗结核粘膜疫苗重构的研究[D];重庆医科大学;2009年
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