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《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2011年03期
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德国小蠊精氨酸激酶基因的克隆、表达及免疫活性测定

闫浩  夏立新  陈家杰  刘娇  邓志琼  易海涛  刘小平  
【摘要】:目的克隆德国小蠊精氨酸激酶(arginine kinase,AK)全长基因,表达、纯化重组AK蛋白,并研究蛋白的免疫反应性。方法提取德国小蠊总RNA,反转录为cDNA,设计特异性引物,PCR克隆德国小蠊AK片段,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白表达和纯化结果,用蛋白质印迹(Western blotting)分析重组AK蛋白的免疫反应性。结果德国小蠊AK基因开放阅读框全长为1071bp,编码356个氨基酸,GenBank登录号为FJ514482。与GenBank中已登录的德国小蠊序列(登录号为EU429466)比对,同源性达97.2%。重组质粒pET-28a-AK在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为45 000,主要以可溶性形式表达,经亲和层析获得目的蛋白。Western blotting分析结果表明,重组AK蛋白可被过敏性患者血清识别,免疫反应性良好。结论成功获得德国小蠊精氨酸激酶全长基因,重组AK蛋白具有良好的免疫反应性。

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【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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5 任晓霞;苦荞过敏原TBa的定点突变及免疫活性研究[D];山西大学;2010年
6 金蓉;新生儿脐血IL-4,IL-13,IFN-γ,TGF-β测定及意义[D];青岛大学;2010年
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10 张洪刚;亚洲玉米螟滞育和抗寒性研究[D];中国农业科学院;2010年
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