| | | | | 低氧培养的人视网膜神经胶质细胞对血管内皮前体细胞的作用 | | | 柳夏林;李拥军;刘奕志;葛坚 | | | 目的探讨低氧环境下视网膜神经胶质细胞介导的低氧反应分子通路对血管内皮前体细胞(EPCs)的作用及其机制。方法人外周血循环EPCs(CD34+、CD33+双标阳性细胞)经荧光免疫激活流式细胞仪分选收集后培养;分别使用低氧(5%O2,实验组)和正常氧(20%O2,对照组)的人视网膜神经胶质细胞生长培养液作为条件培养液,多次处理EPCs,检测和分析EPCs的增殖活性(WST-1比色法)和分化能力(免疫荧光染色法);采用酶联免疫吸附试验检测实验组和对照组视网膜神经胶质细胞血管内皮生长因子(VEGF)的释放量,采用免疫印迹法检测细胞核内低氧反应因子(HIF)-1α的表达。结果实验组EPCs的增殖活性(吸光度值为1·53±0·10)和分化能力[细胞数目为(29±5)个]均较对照组增殖活性(吸光度值为0·88±0·25)和分化能力[细胞数目为(18±8)个]明显增强(P<0·05)。实验组培养6、24h后神经胶质细胞核内均可检测到HIF-1α表达,而对照组表达缺失。实验组视网膜神经胶质细胞VEGF的释放量较对照组明显增加,且具有时相性,培养24h实验组VEGF的释放量[(319·16±34·12)pg/ml]较对照组[(220·28±24·33)pg/ml]增加44·88%(P<0·01)。结论视网膜神经胶质细胞在低氧培养状态下可通过细胞因子的分泌作用直接促进培养的EPCs增殖和分化,这可能在EPCs参与的新生血管形成中发挥重要的介导作用,该作用与神经胶质细胞HIF-1α和VEGF的信号通道激活有关。本研究对神经胶质细胞介入血管前体细胞的病理生理作用进行了初步探讨。
【作者单位】：中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;美国杜克大学医学中心;中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室;中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室
【关键词】：视网膜;神经胶质;内皮,血管;缺氧;细胞,培养的
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30500554)
【分类号】：R774.1
【DOI】：CNKI:ISSN:0412-4081.0.2006-12-014
【正文快照】：
视网膜血管内皮损伤可导致组织高渗水肿、缺血低氧,由此促发的大量异常新生血管形成是增生性糖尿病视网膜病变及其他视网膜血管病变等严重不可逆致盲眼病的主要病理表现。近年来随着有关血管内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的研究不断深入,其在血管内皮损伤、修复及新生血管形成中的作用日益受到关注,成为目前研究的新热点[1-3]。但是,迄今血管EPCs参与视网膜血管内皮损伤修复和新生血管形成的机制尚不清楚,而有关视网膜血管病变的病理研究仅局限在血管内皮损伤促发部分血管生成因子释放,从而加重组织水肿和缺血缺氧的… | | |  推荐 CAJ下载  PDF下载 | | | CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式 | | | | Effects of human retinal glial cells under hypoxic conditions on circulating endothelial progenitor cells | | | LIU Xia-lin;LI Yong-jun;LIU Yi-zhi;GE Jian.Zhongshan Ophthalmic Center;State Key Laboratory of Ophthalmology;Sun Yat-sen University;Guangzhou 510060;China | | | Objective The specific signaling events by which circulating endothelial progenitor cells (EPCs) responding to alterations of the retinal vasculature induced by hypoxia are not yet completely understood. Our goal was to generate a suitable experimental model for the identification of such factors as well as the effects of these factors on the EPCs. Methods Primary cultures of human retinal glial cells were incubated under hypoxic or normoxic conditions. Effects of hypoxia were confirmed by analysis of HIF-1α and VEGF expression. Circulating EPCs (CD34~+,CD133~+ double-positive cells) were isolated by FACS Vantage~ TM from the human periphery blood. EPCs were treated with conditioned media from retinal glial cells incubated under either hypoxic or normoxic conditions. Effects of conditioned media on the proliferation and differentiation of EPCs were evaluated. Results Incubation of human retinal glial cells at low oxygen concentration for 24 hours lead to HIF-1α expression and a significant increase of VEGF released to the media[(319.16±34.12) pg/ml versus (220.28±24.33) pg/ml]as compared to the control cultures incubated at normoxic conditions (P<0.01). Treatment of EPCs with conditioned medium from retinal glial cells incubated at low oxygen concentration resulted in an increase of proliferative activity (day 3: 0.83±0.10 versus 0.61±0.22,P<0.05; day 7: 1.53±0.21 versus 0.88±0.25,P<0.05) and presence of differentiated endothelial cells as compared to cells cultured with conditioned media from normoxic cultures. Conclusions Conditioned media from retinal glial cells contain factors capable of activating the proliferation and differentiation of circulating EPCs. Analysis of the effects of conditioned medium from neuronal glial cells incubated under hypoxic conditions on circulating human EPCs might be useful in providing an effective experimental method for the identification of the specific signaling molecules involved in the activation of circulating EPCs for the regeneration of retinal blood vessels.
【Keyword】：Retinal;Neuroglia;Endothelium,vascular;Anoxia;Cells,cultured |
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