| | | | | 短发夹状RNA对卵巢癌细胞survivin mRNA表达及紫杉醇药物敏感性的影响 | | | 颜笑健;梁立治;曾宗渊;符立梧;石智 | | | 目的观察表达短发夹状RNA(shRNA)的mU6/survivin质粒转染卵巢癌细胞株OVCAR3细胞后,对OVCAR3细胞survivin mRNA表达的抑制作用,以及对OVCAR3细胞紫杉醇药物敏感性的影响。方法将表达绿色荧光蛋白的pEGFPC2质粒与脂质体按不同比例转染OVCAR3细胞,流式细胞仪检测其转染效率。根据转染效率最高时pEGFPC2质粒与脂质体的比例,将mU6/survivin质粒转染入OVCAR3细胞。实验分为3组未转染组、脂质体组、转染组,RT-PCR技术检测3组OVCAR3细胞中survivin mRNA的表达,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组OVCAR3细胞对紫杉醇的50%抑制浓度(IC50)。结果pEGFPC2质粒与脂质体按1∶2比例转染OVCAR3细胞时其转染效率最高,达23.6%。将mU6/survivin质粒与脂质体也按1∶2比例转染OVCAR3细胞24h后,未转染组、脂质体组、转染组细胞survivin mRNA的相对含量分别为0.81±0.05、0.79±0.12、0.26±0.04,转染组survivin mRNA相对含量下降至未转染组的32%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。转染组转染24h后,细胞凋亡率为(31.9±1.2)%,明显高于未转染组的(4.9±0.7)%和脂质体组的(5.6±0.5)%(P=0.000);转染组细胞周期被阻滞于G0/G1期,G2/M期减少,分别与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,未转染组、脂质体组、转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50分别为(0.305±0.032)、(0.157±0.031)、(0.019±0.001)μmol/L,转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50降低为未转染组的1/16,两组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论shRNA可有效抑制卵巢癌细胞survivinmRNA的表达,并显著提高了卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。
【作者单位】：中山大学肿瘤防治中心妇科;中山大学肿瘤防治中心妇科;中山大学肿瘤防治中心头颈科;中山大学肿瘤防治中心实验研究部;中山大学肿瘤防治中心实验研究部 510060广州;现在温州医学院附属第一医院妇产科325000;510060广州;510060广州;510060广州;510060广州
【关键词】：RNA干扰;卵巢肿瘤;微管相关蛋白质类;紫杉酚
【基金】：广东省自然科学基金资助项目(2003-31746)
【分类号】：R737.31;
【DOI】：cnki:ISSN:0529-567X.0.2005-09-010
【正文快照】：
诱导肿瘤细胞凋亡和增强化疗药物的敏感性,是近年来肿瘤治疗的重要策略。研究发现,许多化疗药物通过Fas、Bax、bcl-2基因以及线粒体等途径介导细胞凋亡,而survivin基因直接作用于细胞凋亡通路最下游的效应分子caspase-3,-7(属半胱氨酸蛋白酶类),抑制细胞凋亡[1]。另外,紫杉醇等 | | | | | |  推荐 下载CAJ全文  下载PDF全文 | | | CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式 | | | | Influence of short hairpin RNA on survivin mRNA expression and chemosensitivity to paclitaxel in ovarian cancer cells | | | YAN Xiao-Jian*;LIANG Li-zhi;ZENG Zong-yuan;FU Li-wu;SHI Zhi. *Department of Gynecology;Cancer Center;Sun Yat-sen University;Guangzhou 510060;China Corresponding author: LIANG Li-zhi;510060 Guangzhou;Department of Gynecology;Cancer Center;Sun Yat-sen University | | | Objective To investigate the influence of short hairpin RNA (shRNA) expression plasmid against gene survivin(mU_6/survivin)on survivin mRNA expression and chemosensitivity to paclitaxel in ovarian cancer cells OVCAR3. Methods OVCAR3 cells were transfected with plasmid pEGFPC_2 formulated with lipofectamine 2000 at different concentrations. The transfection efficiency was examined by flow cytometry. The expression of survivin mRNA of OVCAR3 cells after transfection with the plasmid mU_6/survivin with the high efficiency ratio was observed by RT-PCR. The effect of the plasmid on the cell cycle and apoptosis was analyzed by flow cytometry. The chemosensitivities of transfected cells to paclitaxel were determined by methyl thiazolyl tetrazolium(MTT). Results The optimal transfection efficiency was obtained when pEGFPC_2∶ lipofectamine 2000 was 1∶ 2. Compared with the non-transfected groups, 0.81±0.05, the mRNA of survivin in OVCAR3 cells was reduced clearly after transfection with mU_6/survivin, 0.26±0.04. shRNA reduced the expression level of survivin mRNA to 32% of non-transfected groups(P<0.01). The apoptotic rate of survivin shRNA group reached (31.9±1.2)%, which was much higher than those of non-transfected (4.9±0.7)% and lip alone groups(5.6±0.5)%(P=0.000). Cell cycle analysis showed that survivin shRNA induced accumulation of cells in G_0/ G_1 phase with a decrease of cells in G_2/M phase after being cultured for 24 hours compared with non-transfected group(P<0.01). MTT results showed that the 50% inhibiting concentration (IC_ 50 ) of paclitaxel in non-transfected, lip alone and survivin shRNA transfected groups was (0.305±0.032),(0.157±0.031), and(0.019±0.001)μmol/L respectively. Compared with non-transfected group,shRNA increased the chemosensitivity of OVCAR3 cells to paclitaxel by 16 fold(P=0.000). Conclusion Sequence specific shRNA targeting survivin can effectively suppress the expression of survivin mRNA and enhance the chemosensitivity to paclitaxel in ovarian cancer cells significantly.
【Keyword】：RNA interference;Ovarian neoplasms;Mierotubule-associated proteins;Paclitaxel |
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