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《中国分子心脏病学杂志》 2004年01期
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CARP基因重组腺病毒载体的构建

石毅  刘宝华  张震  汪一波  张禅那  惠汝太  
【摘要】:目的 :利用Adeasy 1系统 ,构建并鉴定CARP基因重组腺病毒载体。方法 :PCR扩增含有CARP全长cDNA的片段 ,经测序验证无误后 ,亚克隆至pAdTrack CMV穿梭质粒 ,再与pAdEasy 1质粒在大肠杆菌BJ5 183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒。经过抗性筛选以及酶切鉴定得到阳性的重组质粒 ,再在 2 93细胞中进行包装扩增 ,利用Adeasy系统上的绿色荧光蛋白标签鉴定病毒表达。结果 :测序证实PCR产物为CARP全长cDNA ;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功 ;转染 2 93细胞 3天后可见绿色荧光 ,回收病毒可以重复感染 2 93细胞 ,证明病毒

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