| | | | | 均匀设计优化喜盐鸢尾ISSR-PCR体系 | | | 杜欣;董玉芝;陈虹 | | | 以新疆野生喜盐鸢尾DNA为模板,采用U20(54)和U12(34)均匀设计表,通过4因素5水平和4因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素如Mg2+、dNTP、引物以及TaqDNA聚合酶浓度以及循环数和退火温度等进行优化筛选,建立了适合喜盐鸢尾的最佳ISSR-PCR反应体系:在25μL反应体系中,包括2.5μL 10×PCRBuffer,2.0mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTP,0.1μmol/L引物,0.5UTaqDNA聚合酶,40 ng模板DNA。扩增程序为:94℃预变性3 min;接着进行40个循环:94℃变性45 s,52.1℃退火30 s,72℃延伸1.5 min;循环结束后,72℃延伸5 min,4℃保存。
【作者单位】：新疆农业大学林学院;新疆农业大学林学院;新疆农业大学林学院 乌鲁木齐830052;乌鲁木齐830052;新疆农业大学农业生物技术重点实验室/新疆大学农学院;乌鲁木齐830052;乌鲁木齐830052
【关键词】：喜盐鸢尾;均匀设计;ISSR-PCR
【基金】：国家环保总局项目[二-(一)-3-2号]
【分类号】：S682.19
【DOI】：CNKI:SUN:XJNX.0.2008-03-004
【正文快照】：
我国具有丰富的鸢尾属(Iris.L.)植物种质资源,关于鸢尾属植物,从种子的休眠与萌发[1~2],开花结实特性[3],抗性生理[4],组织培养[5]等方面都有诸多报道,所研究的鸢尾属植物也有较多种,例如德国鸢尾(I.germanica)、黄菖蒲(I.pseudacaorus)、蝴蝶花(I.japonica Thunb)、马蔺(I.lac | | |
| | |  推荐 CAJ下载  PDF下载 | | | CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式 | | | | Optimization of ISSR-PCR System of Iris halophila by Uniform Design | | | DU Xin1;DONG Yu-zhi1;2;CHEN Hong1 (1.College of Forestry;Xinjiang Agricultural University;Urumqi 830052;China;2.Key Laboratory of Agricultaral Biological Technique of Xinjiang Agricultural University;College of Agronomy;Urumqi 830052;China) | | | U20(54)and U12(34)uniform design diagrams were amplified to optimize the influencing factors of ISSR-PCR system,including Mg2+,dNTP,primer and TaqDNA polymerase.The suitable ISSR-PCR system and ISSR-PCR procedure for Iris halophila of Xinjiang were established as follows:each 25 μL ISSR-PCR amplification reaction solution was consisted of 2.5 μL PCRBuffer,2.0 mmol/L Mg2+,250 μmol/L dNTP,0.1 μmol/L primer,0.5U TaqDNA polymerase and 40ng template DNA.The suitable ISSR-PCR procedure was 1 cycle of denaturing for 3 min at 94℃,40 cycles of denaturing for 45 s at 94℃,annealing for 30 s at 52.1℃,extending for 1.5 min at 72℃ and the last cycle of extending for 5 min at 72℃.
【Keyword】：Iris Halophila;uniform design;ISSR-PCR |
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