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《天津医科大学学报》 2019年05期
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SUZ12过表达及敲减恶性外周神经鞘瘤稳定细胞株的建立及其意义

张静  高雅  李新宇  朱香熹  孙硕遥  肖可  王静  刘嘉岳  赵玉龙  李光明  朱泽  
【摘要】:目的:构建SUZ12基因过表达和敲减的恶性外周神经鞘瘤(MPNST)稳定细胞株并探讨其意义。方法:PCR合成SUZ12基因全长并设计合成SUZ12基因的3对特异性sgRNA干扰靶点序列(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3),构建重组表达质粒,转染293T细胞,包装慢病毒颗粒并用荧光法测定其滴度。确定慢病毒感染的最适MOI以及嘌呤霉素筛选的最适剂量,转染ST88-14细胞,构建过表达及敲减的MPNST稳定细胞株。荧光显微镜观察稳定株绿色荧光蛋白的表达情况,RT-qPCR在mRNA水平进行验证,MTT法检测SUZ12过表达和敲减组增殖活性的改变。结果:LV-SUZ12和LV-SUZ12-sgRNA转导入ST88-14细胞并稳定表达绿色荧光蛋白,RT-qPCR结果显示过表达稳定株SUZ12表达量明显升高(P0.05),CRISPR/Cas9敲减稳定株SUZ12表达量明显下降(P0.05)。MTT结果显示过表达SUZ12基因抑制MPNST细胞的增殖。结论:SUZ12过表达和敲减的稳定细胞株构建成功,初步验证结果表明过表达SUZ12基因抑制MPNST细胞的增殖,为针对SUZ12在MPNST中的生物学功能、作用机制和疾病诊断治疗的进一步研究提供了实验基础。

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【参考文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 薛才林;SUZ12在肝癌增殖及转移中具体作用及其机制研究[D];广州医科大学;2017年
【共引文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李文朝;PHF19在鼻咽癌中的表达及生物学功能研究[D];广西医科大学;2018年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 张静;高雅;李新宇;朱香熹;孙硕遥;肖可;王静;刘嘉岳;赵玉龙;李光明;朱泽;;SUZ12过表达及敲减恶性外周神经鞘瘤稳定细胞株的建立及其意义[J];天津医科大学学报;2019年05期
2 万法青;刘易军;单玉兴;张海玉;;甲氨蝶呤对骨肉瘤细胞株的作用观察[J];中国实验诊断学;2012年03期
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