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《苏州大学学报(医学版)》 2012年06期
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沙门菌基因突变株的构建方法研究

叶颖  邱桥成  李嫄渊  吴淑燕  黄瑞  
【摘要】:目的研究沙门菌基因突变株构建的方法,为利用基因工程技术对细菌进行遗传性状改造,深入研究沙门菌防治手段提供工具。方法选用不同感受态细菌培养时间、培养基、感受态细胞浓度和电击参数等条件,以小分子质粒pMDT-GFP电转化受试菌,通过计算转化效率确定优化的电转条件。在此基础上用大分子质粒pGBM151-spvB电转化受试菌,再以蔗糖诱导同源重组,筛选突变株。结果以含15 g/LNaCl的高渗LB培养基培养细菌至A600为0.3,制备浓度为1010cfu/ml的感受态细胞,在参数为2.5 kV、400Ω、50μF条件下,小质粒pMDT-GFP电转鼠伤寒沙门菌可获得高转化效率。以往难以转化的大质粒pGBM151-spvB在该条件下成功获得转化子,进而成功构建突变株。结论上述方法能用于高效构建沙门菌基因突变株。

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