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《生物工程学报》 2002年02期
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表达大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B融合蛋白基因工程菌株的构建

许崇波  卫广森  
【摘要】:利用PCR技术 ,从大肠杆菌C8390 2质粒中扩增出K88ac基因、ST1 突变基因和LTB 基因 ,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化 ,构建了含K88ac ST1 LTB 融合基因表达载体的重组菌株BL2 1(DE3) (pXKST3LT5 )。经酶切鉴定和DNA序列分析证实 ,构建的重组质粒pXKST3LT5中含有K88ac ST1 LTB 融合基因 ,且基因序列和阅读框架均正确。经ELISA检测 ,重组菌株表达的K88ac ST1 LTB 融合蛋白能够被ST1 单抗、LTB 和K88ac抗体识别。经乳鼠灌胃试验证实 ,表达的融合蛋白已丧失天然ST1 肠毒素的活性。免疫实验结果表明 ,K88ac ST1 LTB 融合蛋白能够诱发小白鼠产生抗体 ,该抗体具有中和天然ST1 肠毒素的毒性作用 ,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪黄、白痢基因工程菌苗的候选菌株
【作者单位】宁夏大学生物工程系 辽宁省益康生物制品厂
【分类号】:Q78

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 许崇波,卫广森,王卓;仔猪大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗的研究 Ⅱ.安全性试验和最小免疫剂量的测定[J];黑龙江畜牧兽医;2002年09期
2 许崇波,卫广森,王卓;仔猪大肠杆菌K88_(ac)-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗 Ⅲ.实验室生产与检验[J];黑龙江畜牧兽医;2002年10期
3 许崇波,卫广森,王文成,王卓;仔猪大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗 Ⅳ.保存期试验和田间试验[J];黑龙江畜牧兽医;2002年11期
4 ;生鲜乳收购站标准化管理技术规范[J];黑龙江畜牧兽医;2009年12期
5 李敏;郭乐;王亮;王玉炯;赵辉;;大肠杆菌耐热性肠毒素ST Ⅰ突变体与黏附素K99融合基因的构建及其表达[J];黑龙江畜牧兽医;2009年23期
6 宋杰;钱明明;柏佳宁;赵宝华;;表达ST1-LTB-α-β融合蛋白基因工程菌株的构建及其免疫原性分析[J];生物工程学报;2008年08期
7 逄媛;沈志强;崔言顺;聂小想;王金良;郭广君;;仔猪腹泻性大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2007年05期
8 周凯,郑海洲,边艳青,赵宝华;肠产毒性大肠杆菌分子生物学及基因工程疫苗的研究进展[J];微生物学杂志;2003年05期
9 范昌发,龚伟,梅兴国,刘燕;呼吸道合胞病毒G蛋白基因片段的克隆及高效表达[J];中国病毒学;2004年06期
10 卫广森,陆承平,陈溥言;大肠埃希氏菌耐热性肠毒素的研究进展[J];中国兽医科技;2003年01期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 刘淑杰;大肠杆菌粘附素亚基FaeG在Lactococcus lactis中的表达及免疫原性研究[D];江南大学;2010年
2 卫广森;新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的研究与应用[D];南京农业大学;2004年
3 胡春霞;大肠杆菌K88菌毛蛋白亚基FaeG重组乳酸乳球菌的构建及其对ICR小鼠免疫保护的研究[D];浙江大学;2009年
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1 温丽娟;共表达ETEC K99、K88重组干酪乳杆菌的构建及其免疫研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
2 袁万哲;仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗的研制[D];南京农业大学;2004年
3 王远志;产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的克隆与原核表达[D];新疆农业大学;2004年
4 杨健美;表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌的免疫效力及Stx 2e单克隆抗体的研究[D];扬州大学;2005年
5 庄娟;口蹄疫病毒VP1T、B细胞表位融合蛋白及与大肠杆菌肠毒素融合表达产物的研究[D];南京师范大学;2005年
6 武军元;融合蛋白K88ac-STⅡ和VP4-STI对实验小鼠的免疫效果研究[D];石河子大学;2006年
7 许程剑;产肠毒素大肠杆菌LTB-K99融合基因的构建与表达[D];石河子大学;2006年
8 王卓;仔猪大肠杆菌病基因工程菌株GE-3的构建与免疫原性研究[D];吉林大学;2007年
9 王云飞;呼吸道合胞病毒重组蛋白D9-G126-F/M2的表达及检测[D];西北农林科技大学;2006年
10 贾静;多株猪致病性大肠杆菌菌毛培养、提取及菌毛蛋白的研究[D];四川农业大学;2007年
【参考文献】
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4 许崇波,于凤芹,卫广森,王卓,冯书章,王文成,马成国,李尚波;大肠杆菌肠毒素ST_1-LT_B融合基因的构建[J];中国兽医学报;1998年05期
【共引文献】
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1 史素云;;大肠杆菌毒力因子研究进展[J];现代农业科技;2008年19期
2 张越男,张彦明,张怀喜;大肠杆菌毒力因子研究概况[J];动物医学进展;2003年04期
3 许崇波,卫广森,王卓;仔猪大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活苗的研究 Ⅱ.安全性试验和最小免疫剂量的测定[J];黑龙江畜牧兽医;2002年09期
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9 王莹,周智爱,李震,曹祥荣;利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒素LT_B0ST_I融合基因[J];上海农业学报;2001年01期
10 庄娟,曹祥荣,潘洁,饶忠,陈波,尤永进;大肠杆菌热敏性肠毒素研究进展[J];上海农业学报;2005年02期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 刘淑杰;大肠杆菌粘附素亚基FaeG在Lactococcus lactis中的表达及免疫原性研究[D];江南大学;2010年
2 陈书霞;ETEC定居因子CS3对胡萝卜的转化及肠毒素LTB-ST病毒表达载体的构建[D];西北农林科技大学;2003年
3 卫广森;新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的研究与应用[D];南京农业大学;2004年
4 祝建波;动物腹泻重组抗原基因的克隆与表达及植物疫苗载体的初步研究[D];华南热带农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 华荣虹;猪源ETEC菌毛基因的多重PCR检测及其菌毛抗体的研制[D];南京农业大学;2002年
2 张越男;天津地区猪源大肠杆菌某些生物学特性与致病力相关性研究[D];西北农林科技大学;2003年
3 袁万哲;仔猪大肠杆菌病K88-K99-987P-F41四价亚单位疫苗的研制[D];南京农业大学;2004年
4 王远志;产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的克隆与原核表达[D];新疆农业大学;2004年
5 刘国平;猪水肿病大肠杆菌分离鉴定及fedF基因克隆和表达的研究[D];华中农业大学;2004年
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7 齐翀;大肠杆菌毒素融合基因的构建及其表达产物免疫原性研究[D];吉林大学;2005年
8 庄娟;口蹄疫病毒VP1T、B细胞表位融合蛋白及与大肠杆菌肠毒素融合表达产物的研究[D];南京师范大学;2005年
9 柏佳宁;预防仔猪腹泻基因工程菌株的构建[D];河北师范大学;2006年
10 王卓;仔猪大肠杆菌病基因工程菌株GE-3的构建与免疫原性研究[D];吉林大学;2007年
【同被引文献】
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1 尹淑琴;范艳;常泓;;基因工程菌的高密度发酵研究[J];安徽农业科学;2007年11期
2 耿学辉,王之梁,钱渊,朱汝南,邓洁,杜金林,朱宗涵;呼吸道合胞病毒北京地区分离株G蛋白的基因分析[J];病毒学报;1996年04期
3 崔德凤,张永红;肠毒素型大肠杆菌菌毛的研究进展[J];北京农学院学报;2001年03期
4 高轩,李潭清;河北省禽病原性大肠杆菌的血清型鉴定[J];河北农业大学学报;1998年01期
5 孟秀彦;刘军;陈现伟;;DNA疫苗在动物医学上的研究进展[J];山东畜牧兽医;2006年02期
6 田文标,邹全明,张卫军;大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究[J];第三军医大学学报;2005年02期
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10 严振龙,董国雄,李俊宝;类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用[J];动物医学进展;2003年02期
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1 王远志;产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的克隆与原核表达[D];新疆农业大学;2004年
【二级引证文献】
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1 李国军;侯喜林;朴范泽;;大肠埃希菌K88ac菌毛蛋白亚基因的原核表达及其免疫原性研究[J];动物医学进展;2007年08期
2 李书光;沈志强;肖跃强;管宇;王金良;;产肠毒素性大肠埃希菌主要毒力因子及疫苗的研究进展[J];动物医学进展;2007年10期
3 唐思静;刘惠莉;;大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚基研究进展[J];动物医学进展;2008年02期
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6 张素辉;曹国文;付利芝;徐登峰;周淑兰;王孝友;;重庆市腹泻仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验研究[J];甘肃畜牧兽医;2007年05期
7 宋杰;柏佳宁;赵宝华;;河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定[J];河北师范大学学报(自然科学版);2007年04期
8 李国军;侯喜林;;大肠杆菌k_(88)ac菌毛蛋白亚基因的克隆、表达及亲和层析纯化[J];黑龙江八一农垦大学学报;2007年04期
9 温丽娟;王桂华;侯喜林;余丽芸;王萌;;共表达ETECK99、K88菌毛蛋白重组干酪乳杆菌的构建[J];黑龙江八一农垦大学学报;2011年03期
10 唐现文;方希修;王寿轩;周根来;;不同配比中草药与卵黄免疫球蛋白复合制剂体外抑菌试验[J];家畜生态学报;2008年04期
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1 唐现文;方希修;王寿轩;周根来;;不同配比中草药与卵黄免疫球蛋白复合制剂体外抑菌试验[A];2009山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2009年
2 张恒慧;尤建嵩;徐永平;金礼吉;李晓宇;;抗仔猪腹泻重组肠毒素暨菌毛复合多价疫苗制备及预防效果的研究[A];生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议论文集——T07家畜微生态与健康养殖专题[C];2012年
3 黄建烨;仵天培;;功能性低聚糖对黄羽种鸡生产性能和血清生化指标的影响[A];第三届(2012)中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2012年
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1 季华员;猪产肠毒素型大肠杆菌F41受体基因的精细定位与鉴别[D];江西农业大学;2011年
2 羊云飞;牦牛、牧民源大肠杆菌分离鉴定、耐药基因检测、PFGE分析及耐药性传递的研究[D];四川农业大学;2011年
3 尤建嵩;产肠毒素大肠杆菌多价肠毒素疫苗的研究[D];大连理工大学;2011年
4 王善辉;呼吸道合胞病毒亚单位疫苗的研究[D];内蒙古农业大学;2009年
5 胡春霞;大肠杆菌K88菌毛蛋白亚基FaeG重组乳酸乳球菌的构建及其对ICR小鼠免疫保护的研究[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张恒;中药“复方黄连散”防治仔猪大肠杆菌性腹泻机理的研究[D];中国农业科学院;2010年
2 温丽娟;共表达ETEC K99、K88重组干酪乳杆菌的构建及其免疫研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
3 吴黎明;不同益生素组合对仔猪生长性能的影响及抗腹泻效果的研究[D];中国农业科学院;2011年
4 王远志;产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的克隆与原核表达[D];新疆农业大学;2004年
5 杨健美;表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌的免疫效力及Stx 2e单克隆抗体的研究[D];扬州大学;2005年
6 庄娟;口蹄疫病毒VP1T、B细胞表位融合蛋白及与大肠杆菌肠毒素融合表达产物的研究[D];南京师范大学;2005年
7 曹传闺;表达致PWD和ED大肠杆菌保护性抗原基因的重组菌的中间试验、环境释放试验及我国部分养殖猪种F18受体基因型的检测[D];扬州大学;2006年
8 丁爱云;大肠杆菌F18菌毛FedF亚单位单克隆抗体的制备及其初步应用[D];扬州大学;2006年
9 罗维;大肠杆菌F18菌毛FedF蛋白及LTB-FedF融合蛋白的表达及免疫原性研究[D];湖南农业大学;2007年
10 李润成;口蹄疫基因工程疫苗的初步研制[D];湖南农业大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 许崇波,卫广森,冯书章,刘子,刘晓明,黄培堂,岳军明;大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合基因的构建及其免疫原性研究[J];畜牧兽医学报;1997年04期
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5 许崇波,冯书章,刘子,黄培堂,刘晓明;大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ基因核苷酸序列分析与免疫原性研究[J];中国兽医学报;1996年04期
6 许崇波,于凤芹,卫广森,王卓,冯书章,王文成,马成国,李尚波;大肠杆菌肠毒素ST_1-LT_B融合基因的构建[J];中国兽医学报;1998年05期
【相似文献】
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1 卫广森,陆承平,陈溥言;大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程菌株的构建[J];中国兽医学报;2003年03期
2 许崇利;许崇波;黄江丽;惠远峰;;大肠杆菌K88ac,ST_1,LT_B基因融合[J];河北师范大学学报(自然科学版);2009年06期
3 许崇利;许崇波;逄越;高凤山;曹阳;;大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B融合基因表达条件的优化[J];畜牧与兽医;2009年04期
4 许崇利;许崇波;逄越;王炎林;;大肠杆菌肠毒素ST_1、LT_B基因融合及其免疫原性研究[J];生物技术;2006年04期
5 何淳;卢圣栋;;基因工程蛋白质产物的纯化[J];医学分子生物学杂志;1991年02期
6 金冬雁;曾庆;周圆;徐荣辉;李玉英;侯云德;;一种兼具抗病毒活性及pHSA结合活性的蛋白——乙型肝炎病毒前S2肽段与人α2a型干扰素的融合蛋白[J];科学通报;1993年02期
7 王文,田志刚,刘钟滨,王郡甫,刘杰,张建华;hIL-13融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达[J];中国免疫学杂志;1998年05期
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1 卫广森;许崇波;王文成;李尚波;王卓;苗玉和;;新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88ac)-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗候选菌株的构建[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(上)[C];2005年
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5 陈金顶;廖明;辛朝安;;鹅Ⅰ型禽副粘病毒株融合蛋白(F)基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
6 杨素荣;姚明辉;;细胞因子GM-CSF、IL-3和GM-CSF/IL-3融合蛋白对辐射致Tf-1细胞凋亡的影响[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
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10 陈丽华;王强;侯万国;;不同链接剂修饰的融合谷胱甘肽活性的研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
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1 记者 朱敏丽 通讯员 潘越;中国医药城首批融合蛋白试剂出口[N];泰州日报;2010年
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3 金陵;融合蛋白试剂首次出口美国[N];中国医药报;2010年
4 记者 张晔 通讯员 刘宁春;一种有效治疗冠心病的融合蛋白发现[N];科技日报;2009年
5 通讯员 沈季 记者 张兆军;抗肿瘤融合蛋白进入临床试验[N];科技日报;2005年
6 记者 魏巍 通讯员 沈季;吉大一抗肿瘤新药进入临床试验阶段[N];长春日报;2005年
7 冯卫东;抑制蛋白相互作用可成为治癌新方法[N];科技日报;2009年
8 ;吉大抗肿瘤生物工程新药进入临床试验[N];中国高新技术产业导报;2005年
9 董丹 刘昱辉 吴元华;基因工程生产降钙素研究方兴未艾[N];中国医药报;2007年
10 本报记者  赖强;单抗药物期待中国加速度[N];医药经济报;2006年
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1 柏亚铎;犬瘟热病毒、犬冠状病毒入侵宿主细胞机制研究[D];中国农业大学;2005年
2 张怀;人Hepcidin融合表达载体的构建、在大肠杆菌中的表达及制备研究[D];北京化工大学;2005年
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4 徐海燕;人BAFF基因转染细胞及其单克隆抗体的生物学特性[D];苏州大学;2005年
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6 蒋骅;GST-EGFR融合蛋白冲击树突状细胞治疗头颈部鳞状细胞癌体内外实验观察[D];浙江大学;2008年
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9 钟根深;以明胶酶为靶点的小型化抗体与力达霉素构建的基因工程强化融合蛋白及其抗肿瘤活性的研究[D];中国协和医科大学;2010年
10 张海涛;重组人干扰素-α2b与内皮抑素肽融合蛋白抗肿瘤研究[D];哈尔滨师范大学;2012年
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1 陈喆;幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和细胞空泡毒素基因的克隆,表达和其融合蛋白免疫反应性的研究[D];浙江大学;2002年
2 韩雪松;应用m_2 AchR-Gilα融合蛋白鉴别m_2 AchR的特异性配体[D];中国医科大学;2004年
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5 逄媛;猪源产肠毒素性大肠杆菌K88、K99,987P、F41双基因串联表达的研究[D];山东农业大学;2008年
6 陈小颖;ω-芋螺毒素M ⅦA的表达与纯化[D];浙江大学;2004年
7 徐忠林;共表达NDV F 基因与H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2005年
8 王刚;志贺毒素B亚单位与柯萨奇病毒B组3型VP1融合DNA疫苗的构建及其免疫效果的观察[D];河北医科大学;2005年
9 孙元田;人神经营养素-4的原核表达与纯化[D];四川大学;2005年
10 李娟;外周血白细胞BCR/ABL基因产物分析及其临床应用[D];天津大学;2006年
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