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《南京中医药大学学报》 2019年04期
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黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究

李正红  史俊  赵君谊  张露  高坤  盛梅笑  
【摘要】:目的研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制。方法①人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)在RPMI 1640(含1%FCS)培养液中培养24 h后分为6组:空白组:正常培养液2 mL;高糖腹透液组:含4.25%PDS 1 mL+正常培养液1 mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50μmol/mL。②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族(ROS)水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况。结果①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高。结论①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定。

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