《怀化学院学报》2006年08期 加入收藏    获取最新    人类睾丸凋亡相关基因蛋白(TSARG2)在大肠杆菌中的表达和纯化   邓云;聂东宋;卢光琇   　　目的获得重组TsARG2基因蛋白,为进一步研究其功能和制备特异抗体奠定基础.方法根据已报道的TsARG2基因序列,采用RT-PCR的方法获得TsARG2基因.将所得的PCR产物插入原核表达载体pQE30中,得重组质粒(pQE/TSARG2)并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有六个组氨酸的融合蛋白,采用镍固定金属亲和层析法纯化.结果序列分析表明TSARG2基因成熟肽编码区含有918bp,编码305个氨基酸;与GenBank(AY040204)中已报道的TSARG2分离物的核苷酸序列有100%同源性.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的66%,分子质量约为35kDa.经Ni2+-NTAagarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论在大肠杆菌中获得了TsARG2基因蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础. 【作者单位】：人类干细胞国家工程研究中心;中南大学生殖与干细胞研究所;人类干细胞国家工程研究中心;中南大学生殖与干细胞研究所;人类干细胞国家工程研究中心;中南大学生殖与干细胞研究所 湖南长沙410078;湖南长沙410078;湖南长沙410078 【关键词】：TSARG2;表达与纯化;大肠杆菌 【基金】：国家重点基础研究发展规划项目973课题:人类精子发生相关新基因的筛选及克隆(G1999055901). 【分类号】：Q786 【DOI】：cnki:ISSN:1671-9743.0.2006-08-020 【正文快照】： 　　人类睾丸是一种具有高度增殖能力的组织,但成年睾丸中产生的成熟精子的数量要比预计生成的精子数少20%～75%[1,2].大量研究表明睾丸生精细胞自发性退化是通过凋亡发生的,同时还发现在不育男性中精子凋亡异常增多[3],因此,凋亡调控的紊乱可能是特发性男性不育症的一个重要决定因素.睾丸生殖细胞的凋亡是一个由多基因参与的复杂过程.目前有关睾丸生殖细胞凋亡的研究尚处于起步阶段,迄今为止,尚未克隆出特异性睾丸生殖细胞凋亡基因.而克隆新的特异性睾丸凋亡相关基因是进一步了解生殖细胞凋亡机制和生物学过程的关键所在,对阐明精子发生的生理…   推荐 CAJ下载           PDF下载   CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式   Expression and Purification of Human Testis Spermatocyte Apoptosis-related Gene,Tsarg2 Protein in E.coli   DENG Yun;NIE Dong-song;LU Guang-xiu (Institute of Human Reproductive and Stem Cell Engineering; Central South University;Changsha;Hunan 410078)   　Objective To obtain recombinant TSARG2 protein by prokaryotic expression for its functioned study.Methods The encoding sequence for mature peptide of human TSARG2 was amplified with RT-PCR and inserted into pQE30 vector to establish the prokaryotic expressing system coupled with 6×His.The competent cells of host strain of M15 were transformed by the recombinant plasmid(pQE30/TSARG2).Expression of the target protein was induced with IPTG and assayed by SDS-PAGE after sequencing.The recombinant products were purified by Ni 2+ -NTA agarose column.Results:The cloned fragment of human TSARG2 was 100% consistent with that in Genbank(AY040204),which was deduced to express 305 Aa mature peptide of human TSARG2 correctly.The expressed fusion protein was 35 kD in SDS-PAGE as expected and 66% in the total quatiy of germ proteins.Conclusion:The homologous recombinant human TSARG2 was obtained after Ni-affinity chromatograph,which could be used for its functioned study and preparation of specific antibodies. 【Keyword】：TSARG2;expression and purification;E.coli   【参考文献】   共（4）篇    中国期刊全文数据库 找到 4 条   1 刘上峰,李麓芸,傅俊江,邢晓为,刘刚,卢光琇; 小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因SRG2的分子克隆 [J];生物化学与生物物理学报; 2002年06期 2 刘上峰,李麓芸,傅俊江,刘刚,邢晓为,卢光琇; 利用巢式PCR技术和人类基因组草图搜索法快速获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG2 [J];生物化学与生物物理学报; 2002年03期 3 姜宏,李麓芸,卢光琇; 小鼠生精细胞凋亡相关基因的分子克隆 [J];生物化学与生物物理学报; 2001年04期 4 侯巍,许淑芬,刘玲丽,杨晓虹,谭岩; 人心肌型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在大肠杆菌中的表达和纯化 [J];中国实验诊断学; 2005年03期   【共引文献】   共（22）篇    中国期刊全文数据库 找到 10 条   1 姜宏,李麓芸,卢光琇; PCR法直接筛选重组阳性克隆 [J];安徽医学; 2005年02期 2 周畅,师建明,肖湘文,李麓芸,卢光琇; 运用数字差异展示方法克隆一个人类新的锌指蛋白基因ZNF474(英文) [J];激光生物学报; 2006年01期 3 姜宏,李麓芸,卢光琇; PCR法标记探针在核酸杂交中的应用 [J];临床检验杂志; 2004年02期 4 赵玉华,刘秉文,白怀; 高凝状态大鼠主动脉表达上调新基因HCR2的克隆及生物信息学分析 [J];四川大学学报(医学版); 2005年05期 5 莫亚勤,李麓芸,周畅,卢光; 利用电子差异展示方法克隆人类睾丸高表达新基因SPATA11 [J];生命科学研究; 2004年02期 6 黄凤兰,胡国富,胡宝忠; 抑制性消减杂交在生物基因克隆中的应用 [J];生物技术通讯; 2004年04期 7 李峰,蒋卫红,杨旭宇,尹志华,冯湘玲,刘卫东,王磊,周文,姚开泰; 鼻咽癌相关基因NAP1的克隆及鉴定 [J];生物化学与生物物理进展; 2004年05期 8 李峰,蒋卫红,尹志华,杨旭宇,冯湘玲,刘卫东,姚开泰; 成人视网膜假定蛋白基因ARHP的克隆及生物信息学分析 [J];生物化学与生物物理进展; 2003年06期 9 傅俊江,卢光琇,李麓芸,刘刚,邢晓为,刘上峰; 睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析 [J];遗传学报; 2003年01期 10 李汶,卢光琇; 筛选代表小鼠植入前胚胎紧密化相关基因的EST [J];遗传; 2004年02期  中国优秀硕士学位论文全文数据库 找到 2 条   1 崔晓燕; 人肝脏高凝状态相关基因的筛选、生物信息学分析和表达初步研究 [D];四川大学; 2005年 2 巩宏伟; 心肌型脂肪酸结合蛋白原核表达载体（pBV）的构建、表达及纯化 [D];吉林大学; 2006年  中国博士学位论文全文数据库 找到 4 条   1 刘上峰; 人类睾丸生殖细胞凋亡相关新基因TSARG2及小鼠同源基因SRG2的分子克隆及功能的初步研究 [D];中南大学; 2003年 2 杨阿民; 补肾生精丸对腺嘌呤所致生精细胞损伤模型大鼠的干预作用及其机理研究 [D];北京中医药大学; 2006年 3 赵玉华; 高甘油三酯血症大鼠主动脉高血凝相关新基因的筛选、鉴定和克隆 [D];四川大学; 2003年 4 侯巍; H-FABP表达、单克隆抗体制备、测定方法建立及临床应用研究 [D];吉林大学; 2006年   【二级参考文献】   共（11）篇    西文参考文献 找到 10 条   1 Alansari SE, Croal BL; Diagnostic value of heart fatty acid binding protein and myoglobin in patients admitted with chest pain [M];Ann Clin Biochem; 2004年 2 R. K. Ockner, J. A. Manning, R. B. Poppenhausen, et al; A binding protein for fatty acids in cytosol of intestinal mucosa, liver, myocardium,and other tissues [M];Science; 1972年 3 Tanaka T, Hirota Y, Sohmiya K, et al; Serum and urinary human heart fatty acid-binding protein in acute myocardial infarction [M];Clin Biochem; 1991年 4 Glatz JF, Van der Vusse GJ, Simoons ML, et al; Fatty acid-binding protein and the early detection of acute myocardial infarction [M];Clin Chim Acta; 1998年 5 Chkaru Y, Asayama K, Isgii H, et al; Development of a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of human heart type fatty acid-binding protein in plasma and urine by using two different monoclonal antibodies specific for human heart fatty acid-binding protein [M];Journal of Immunological Methods; 1995年 6 Keagten JA, Nieuweuhoven FAV, Bieijen Visser MPV, et al; Disbribation of myoglobin and fatty acid-binding protein in human cardiac autopsises [M];Clin chem; 1996年 7 Keagten JA, Nieuweuhoven FAV, Dieijen Visser MPV, et al; Distribation of myoglobin and fatty acid-binding protein in human cardiac autopsises [M];Clin Chem; 1996年 8 Knowlton AA, Burrier RE, Brecher P; Rabbit heart fatty acid-binding protein [M];Circul Res; 1989年 9 Schaap F G, Specht B, Ger J, et al; One-step purification of rat hearttype fatty acid-binding protein expressed in Escherichia coli [M];Journal of chromatography B; 1996年 10 Gorski J, Hermens WT, Borawski J; Increased fatty acid-binding protein concentration in plasma of patients with chronic ranal failure [M];Clin Chem; 1997年   【相似文献】    中国期刊全文数据库   1 邓云,聂东宋,卢光琇; 人类睾丸凋亡相关基因蛋白(TSARG2)在大肠杆菌中的表达和纯化 [J];怀化学院学报; 2006年08期; 76-79 2 聂东宋,周延凯,刘宇,曹佐英; 小鼠睾丸特异表达新基因(mtLR1)在大肠杆菌中的表达 [J];湖南理工学院学报(自然科学版); 2006年04期; 71-73+93 3 任杏芬; 大肠杆菌 [J];生物学通报; 1993年04期; 22 4 生物防治 [J];生物技术通报; 1992年08期; 63-65 5 林瑞炮,阮冰; 产毒素性大肠杆菌与婴儿猝死综合征 [J];国际流行病学传染病学杂志; 1991年03期; 47-48 6 马亚敏; Teruhiko Beppu等人研究出一种使大肠杆菌能分泌蛋白质的方法 [J];生物技术通报; 1986年06期; 12 7 曹逸云; Ⅰ型脊髓灰质炎病毒壳体蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 [J];国际生物制品学杂志; 1985年04期; 34-35 8 陈世德,时常仁; 致病性大肠杆菌的研究进展与临床 [J];吉林大学学报(医学版); 1981年04期; 120-125 9 秦伟涛,陈劲春,李冬冬; 一种简便快速工艺制备重组人胸腺肽α_1 [J];北京化工大学学报(自然科学版); 2007年03期; 74-77 10 曹廷兵,甘立霞; 应用SoftLink~(TM)Soft Release Avidin树脂亲和层析纯化融合IL-16蛋白 [J];第三军医大学学报; 2000年07期; 97-98  中国优秀硕士学位论文全文数据库   1 刘玲丽; 三种带有不同信号肽的GFP真核表达载体和H-FABP原核表达载体的构建 [D];吉林大学; 2005年 2 姜秀英; His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌与杆状病毒表达体系中的表达与纯化 [D];苏州大学; 2005年 3 多海刚; 禽流感病毒H7N？血凝素（HA1）基因在大肠杆菌中的表达与纯化 [D];新疆农业大学; 2003年 4 余素红; 四种转基因植物胶体金标记快速检测试剂盒的研制 [D];福建农林大学; 2004年 5 陈小颖; ω-芋螺毒素M ⅦA的表达与纯化 [D];浙江大学; 2004年 6 卫红飞; 热休克蛋白65-MUC1融合蛋白发酵条件的优化 [D];吉林大学; 2007年 7 汪诚; 大肠杆菌无细胞体系合成异源蛋白质的初探 [D];浙江大学; 2006年 8 沈宪文; 仔猪大肠杆菌耐药性分析及耐磺胺类药物基因的检测 [D];吉林大学; 2005年 9 李晓静; 炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定 [D];吉林大学; 2005年 10 管于平; 大肠杆菌K-12转醛醇酶基因的克隆及在运动发酵单胞菌CP4中的表达 [D];天津大学; 2005年  中国博士学位论文全文数据库   1 刘上峰; 人类睾丸生殖细胞凋亡相关新基因TSARG2及小鼠同源基因SRG2的分子克隆及功能的初步研究 [D];中南大学; 2003年 2 吴聪明; 广东大肠杆菌耐药性及整合子/基因盒分子流行病学研究 [D];华南农业大学; 2003年 3 黄志立; 纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达 [D];华南理工大学; 2001年 4 成大荣; 断奶仔猪源大肠杆菌毒力因子的分子流行病学及F18菌毛部分特性的研究 [D];扬州大学; 2005年 5 王秀英; 葡萄提取物消除大肠杆菌耐药性的研究 [D];四川大学; 2006年 6 李维; 黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）转化系统的建立及木质素酶cDNA的同源表达 [D];四川大学; 2000年 7 王佳贺; 大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡及其机制的研究 [D];中国医科大学; 2006年 8 郭尚敬; 甜椒小分子量热激蛋白基因的克隆及其在温度逆境下的功能分析 [D];山东农业大学; 2005年 9 顾青; 幽门螺杆菌抗原UreB的基因工程及免疫原性研究 [D];浙江大学; 2005年 10 张友鸿; 人FL基因在大肠杆菌中的表达研究 [D];中国协和医科大学; 2002年  中国重要会议论文全文数据库   1 鲁敬华,王晓玲,王志珍,梁栋材,常文瑞; 大肠杆菌DuaJ的分离,纯化及初步晶体学研究 [A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集 [C]; 2002年 2 王占新,刘璟璇,王新泉,常文瑞,裴钢,梁栋材; β-arrestin1的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化 [A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集 [C]; 2002年 3 钱丽,钱关祥; 可生物素化HLA-A2-BSP融合基因的表达与纯化 [A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集 [C]; 2001年 4 关国华,彭晴,王贵利,李颖; 海栖热袍菌脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 [A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集 [C]; 2006年 5 牛传双,肖少波,方六荣,陈焕春; 增强型绿荧光蛋白突变体在大肠杆菌中的表达与纯化 [A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下） [C]; 2003年 6 黄广华,杨冠珍,吴祥甫,陈江野; 核糖核酸酶抑制蛋白变体Rlv在大肠杆菌和家蚕细胞中的表达 [A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编 [C]; 2003年 7 谢志雄,欧剑虹,赵儒铭,沈萍; Ce~(3+)对大肠杆菌感受态建立和转化的影响 [A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集 [C]; 2002年 8 王富强,周兴军,王彦芳,田雪虹,张谦,贺秉坤; hG-CSF大肠杆菌分泌表达系统的构建 [A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集 [C]; 2001年 9 孙东昌,张衍梅,梅运军,江惠,谢志雄,刘茴茴,陈向东,沈萍; 大肠杆菌自然遗传转化能力的鉴定 [A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集 [C]; 2006年 10 苟小军,孔祥铎,张中华,王晓平,张红缨,张今; HuECSOD在大肠杆菌中的表达研究 [A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集 [C]; 2001年  中国重要报纸全文数据库   1 冯立中; 致泻大肠杆菌是腹泻病祸首 [N];健康报; 2006年 2 钱铮; 研究发现大肠杆菌能量代谢极稳定 [N];医药经济报; 2007年 3 哥科学家发现威胁人类生命的“超级大肠杆菌” [N];中国高新技术产业导报; 2002年 4 王有国; 大肠杆菌新变种的自述 [N];家庭医生报; 2006年 5 董映璧; 美发现基因调控可回应“RNA世界” [N];科技日报; 2006年 6 张禹; 大肠杆菌新变种的自述(接上期) [N];家庭医生报; 2006年 7 生命极限在延伸 [N];深圳商报; 2002年 8 香红星; 走进微生物世界让这个“小精灵”为你增效 [N];中国畜牧兽医报; 2006年 9 广辑; 美科学家改造病毒用于杀菌 [N];农村医药报（汉）; 2007年 10 陈勇; 转基因细胞可作出智能反应 [N];医药经济报; 2005年

相关期刊  >  对联.民间对联故事  >  福建文学  >  红楼梦学刊  >  黄河  >  绿风  >  明清小说研究  >  民族文学研究  >  散文百家  >  散文诗  >  山东文学  >  朔方  >  童话世界(A版)  >  小说评论  >  延河文学月刊  >  章回小说  >  中国诗歌研究  >  中国现代文学研究丛刊  >  中国韵文学刊  >  中华诗词  >  作家  相关机构  > 人类干细胞国家工程研究中心  > 中南大学生殖与干细胞研究所  > 湖南长沙  > 湖南理工学院化学化工系  > 湖南岳阳  > 福建泉州五中  > 生物技术通报  > 国际流行病学传染病学杂志  > 国际生物制品学杂志  > 拿大安大略州医学参考实验室  > 白求恩医科大学微生物教研室  > 北京化工大学生命科学与技术学院  > 北京  > 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室  相关作者  > 邓云  > 卢光琇  > 刘宇  > 任杏芬  > 阮冰  > 曹逸云  > 时常仁  > 陈劲春  > 曹廷兵  > 聂东宋  > 周延凯  > 曹佐英  > 林瑞炮  > 马亚敏  > 陈世德  > 秦伟涛  > 李冬冬  > 甘立霞