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光周期对四指马鲅视网膜结构和视蛋白表达的影响及其生物信息学分析

周慧  区又君  温久福  李加儿  蓝军南  
【摘要】:本实验运用组织学方法对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)视网膜在不同光照周期下组织结构及细胞超微结构的变化进行研究,并对四指马鲅RH1(Rhodopsin)、LWS(Long wave sensitive opsin)、RH2(Rhodopsin-like)、SWS2(Short wave sensitive opsin 2)视蛋白基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析,同时运用荧光定量PCR研究其在不同光照周期下表达量的变化,为该鱼种苗生产和养殖技术提供参考。实验设置昼夜比0 h∶24 h及24 h∶0 h两个实验组和12 h∶12 h对照组,在光照强度为(500±100) lux、水温25℃、盐度5的条件下养殖60 d,并在第30天和第60天时摘取视网膜做组织学切片、超薄切片和荧光定量PCR。显微结构显示:在不同光周期下,四指马鲅视网膜的结构完整、无明显异常。超微结构显示:在12 h∶12 h下,视锥和视杆的外节和内节均结构完整且排列整齐。在0 h∶24 h下,视锥和视杆外节膜盘结构较为完整,但排列较混乱,内节未见明显异常。但在24 h∶0 h下,视锥和视杆的外节膜盘结构受一定程度的损伤。生物信息学分析结果显示:RH1、LWS、RH2、SWS2视蛋白的开放阅读框分别包含1 059 bp、1 074 bp、1 059 bp、1 056 bp,分别编码352、357、352、351个氨基酸,且均具有7 tm跨膜结构域,氨基酸位点分别为54~306、57~319、62~314、60~312。荧光定量PCR结果显示:在第30天时,4种视蛋白在24 h∶0h的表达量显著高于0 h∶24 h和12 h∶12 h的表达量。视蛋白表达量在持续的光照条件下显著增加,是机体对周围光环境的一种适应性变化。随着饲养时间的延长,从总体趋势看,RH1、RH2、SWS2和LWS的表达量在0 h∶24 h和12 h∶12 h条件下增加,而在连续光照条件下,其表达量反而是降低的。而表达量的降低有可能是机体为了维持正常的昼夜节律而做出的一种代偿性的减少。因此,在实际育苗生产过程中,应避免入射光对四指马鲅的长时间照射。

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