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《北京大学学报(医学版)》 2002年06期
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用限制性内切酶制备T载体

陆哲明  柯杨  
【摘要】:目的 :介绍一种制备T载体的方法。方法 :用限制性内切酶XcmⅠ酶切 ,在两端产生T末端 ,制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。 结果 :PCR产物直接和T载体连接 ,用常规氯化钙法制备的感受态菌转化 ,对转化子提取质粒进行酶切鉴定 ,证明阳性率达 80 %。结论 :制备T载体过程简单 ,质量稳定 ,产量高 ,并可扩增等优点
【作者单位】北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室 北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室
【关键词】T载体 DNA限制酶类 遗传载体 基因扩增
【分类号】:R346
【正文快照】:
PCR是目前体外DNA扩增最常用的方法 ,对PCR产物进行快速有效的克隆是开展下游许多实验所要求的。目前TA克隆是一种快速的 ,一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的方法。而商品化的TA克隆系统由于售价高 ,质量批次间不稳定且无法进行循环使用等缺点 ,在实

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 徐锋;武晓丽;;简易快速高效制备T载体[J];安徽农业科学;2008年02期
2 李昭辉,王占民,赵志伦,张勇,柯杨;Fas、Fas配体和IFN-γ在胃癌中的表达[J];北京大学学报(医学版);2003年04期
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【共引文献】
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1 韦传宝;贾玉成;杜宇;;芋花叶病毒检测试剂盒的研制[J];安徽大学学报(自然科学版);2009年04期
2 张运锋;黄光和;李希国;谭学林;;普通菜豆农艺性状相关性分析及主成分分析[J];安徽农学通报;2008年07期
3 尹荣焕;尹荣兰;杨玉英;潘树德;苏振山;白文林;;PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究[J];安徽农业科学;2006年02期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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10 雷楗勇;张莲芬;杨健良;金坚;;人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
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1 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
2 张升祥;家蚕气味结合蛋白基因的研究[D];山东农业大学;2009年
3 李振东;东祁连山高寒草地优势植物内生细菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
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6 张彦民;塔斯品碱抑制血管生成的作用及初步机制研究[D];西安交通大学;2008年
7 齐力旺;华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D];中国林业科学研究院;2000年
8 王宏田;牙鲆免疫系统和抗病力的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
9 郑燕芳;抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌细胞株表型和基因调控的影响[D];第一军医大学;2000年
10 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗素娟;家蚕细胞周期依赖性蛋白激酶家族(CDK)的研究[D];浙江理工大学;2010年
2 陈晓平;家蚕30kD载脂蛋白19G1的表达和功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
3 刘静;家蚕BmycaCR基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
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5 梁莉惠;家蚕BmCH基因的原核表达和亚细胞定位研究[D];浙江理工大学;2010年
6 梁晓艳;人脂联素基因的原核表达纯化、抗体制备及应用[D];郑州大学;2010年
7 朱美真;山东某地方品系鸡鸡胚中禽白血病病毒的分离及序列分析[D];山东农业大学;2010年
8 霍凤梅;洋葱种质资源遗传多样性的SRAP分析与查尔酮合成酶基因的分子克隆与表达研究[D];山东农业大学;2010年
9 赖勇;大麦染色体4H-7H外源基因渗入系构建及其分析[D];甘肃农业大学;2010年
10 吴亮;亲油缓释肥料的制备及在溢油污染潮间带生物修复中的应用[D];中国海洋大学;2010年
【同被引文献】
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2 李敬玺;刘继兰;王选年;银梅;葛亚明;唐海蓉;;超氧化物歧化酶研究和应用进展[J];动物医学进展;2007年07期
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10 任亮,朱宝芹,张轶博,王海燕,李尘远,苏玉虹,巴彩凤;利用软件Primer Premier 5.0进行PCR引物设计的研究[J];锦州医学院学报;2004年06期
【二级引证文献】
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1 唐书谦;伍津津;杨涛;王兵强;杨桂红;;细胞培养中污染支原体的检查[J];第三军医大学学报;2009年23期
2 戴光云;刘银华;王洋;朱升学;张盛周;;c-Met与Fas在胃癌组织中的表达及其相关性[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2009年06期
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4 夏志辉;董军美;罗越华;;利用限制性内切酶XcmⅠ构建T载体[J];热带生物学报;2010年03期
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1 王建勋;1:应用差别PCR技术研究胃癌中c-erbB-2原癌基因的扩增与胃癌的关系 2:胃癌组织中人乳头瘤病毒感染与胃癌关系的研究[D];内蒙古科技大学包头医学院;2005年
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10 张海梁;曹伟胜;徐成刚;任涛;张桂红;罗开健;辛朝安;廖明;;一株猪流感病毒HA、NA基因的扩增、克隆及序列分析[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
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1 ;用最具母乳优点的奶粉喂宝宝[N];中国妇女报;2000年
2 本报记者  宋明;德昌大蒜种植区少癌患[N];凉山日报(汉);2006年
3 张新生;巴西器官移植供体难以为继[N];科技日报;2008年
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1 易甫;纳米粒子介导血管内皮生长因子基因治疗兔心肌缺血的疗效[D];第四军医大学;2006年
2 龚永生;组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体靶向溶栓效应[D];华中科技大学;2008年
3 丁玉梅;遗传性牙釉质发育不全相关基因Fam83h突变的鉴定及亚细胞定位的研究[D];华中科技大学;2009年
4 吕晶玉;WNK基因表达的研究[D];中国医科大学;2003年
5 赵爱志;人源性肝癌单链抗体库的构建[D];第四军医大学;2002年
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7 蒋卫民;HIV-1 p24和gp41融合基因载体的构建以及融合蛋白在原核细胞中的表达[D];复旦大学;2004年
8 邵文爱;单纯疱疹病毒Ⅱ型gD糖蛋白加趋化因子MIP-1α核酸疫苗的构建及初步免疫观察[D];天津医科大学;2004年
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1 白欣;新型基因载体巯基烷基化壳聚糖的制备及体外性质的初步研究[D];安徽医科大学;2009年
2 刘晓曼;肥厚型心肌病心肌肌球蛋白结合蛋白C基因突变的研究[D];山东大学;2006年
3 杨瑞玲;肥厚型心肌病患者Arg810Gly基因突变的研究[D];山东大学;2008年
4 宗华凤;同源框基因HOXA11启动子重组质粒的构建与表达[D];大连医科大学;2007年
5 袁世锦;大鼠输卵管特殊糖蛋白基因片段的扩增、克隆与序列分析[D];武汉大学;2004年
6 崔瑛;GM-CSF和BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建[D];青岛大学;2010年
7 苏明;人源性天然单链抗体库的构建[D];第四军医大学;2002年
8 魏枫;sCD80-Linker-sCD40L融合基因腺病毒载体的构建及鉴定[D];天津医科大学;2004年
9 林陈水;色氨酸酶基因工程菌的构建与表达[D];浙江大学;2002年
10 郭亚宁;北京鸭肥胖基因的克隆与分析[D];西北农林科技大学;2003年
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