收藏本站
《北京大学学报(医学版)》 2002年06期
加入收藏 投稿

用限制性内切酶制备T载体

陆哲明  柯杨  
【摘要】:目的 :介绍一种制备T载体的方法。方法 :用限制性内切酶XcmⅠ酶切 ,在两端产生T末端 ,制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。 结果 :PCR产物直接和T载体连接 ,用常规氯化钙法制备的感受态菌转化 ,对转化子提取质粒进行酶切鉴定 ,证明阳性率达 80 %。结论 :制备T载体过程简单 ,质量稳定 ,产量高 ,并可扩增等优点
【作者单位】北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室 北京大学临床肿瘤学院(北京市肿瘤防治研究所)遗传室
【关键词】T载体 DNA限制酶类 遗传载体 基因扩增
【分类号】:R346
【正文快照】:
PCR是目前体外DNA扩增最常用的方法 ,对PCR产物进行快速有效的克隆是开展下游许多实验所要求的。目前TA克隆是一种快速的 ,一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的方法。而商品化的TA克隆系统由于售价高 ,质量批次间不稳定且无法进行循环使用等缺点 ,在实

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 李昭辉,王占民,赵志伦,张勇,柯杨;Fas、Fas配体和IFN-γ在胃癌中的表达[J];北京大学学报(医学版);2003年04期
2 李昭辉,王占民,赵志伦,张勇,柯杨;原位杂交方法检测IFN-γ在胃癌中的表达[J];肿瘤防治杂志;2003年09期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 尹荣焕;尹荣兰;杨玉英;潘树德;苏振山;白文林;;PCR技术检测熟肉制品中沙门氏菌的研究[J];安徽农业科学;2006年02期
2 陈明林,张小平;安徽羽叶报春RAPD分析实验条件优化的研究[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2003年03期
3 陈一招,徐如祥,张世忠,邹玲;p16基因的不同转染方法对脑胶质瘤细胞的不同作用[J];癌症;2000年02期
4 陈玉宝,侯健,傅卫军,丁思奇,王东星,袁振刚,孔宪涛;As_2O_3对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒作用的机制研究[J];癌症;2003年12期
5 荣举,许丽艳,蔡唯佳,熊兴东,李劲涛,方王楷,沈忠英,李恩民;Fascin 1基因在永生化食管上皮细胞癌变中的表达[J];癌症;2004年03期
6 于华众,李章平,李上共,吴朝明;血浆MMPs水平与甲状腺乳头状癌浸润转移的关系[J];癌症;2005年06期
7 雷质文,黄劼,梁艳,刘莉,俞开康;用核酸探针技术检测脊尾白虾体内的白斑综合症病毒[J];安徽农业大学学报;2003年01期
8 徐翮飞,罗兵;HSV-1包膜糖蛋白G原核表达克隆的构建和表达[J];青岛大学医学院学报;2001年02期
9 王志玉,薛永磊,王小凡,王桂亭,宋艳艳;风疹病毒JR23株E1包膜糖蛋白基因的表达分析[J];病毒学报;2003年03期
10 姜世金,崔治中,张志,丁家波,王玉,杨汉春;Ⅰ型马立克氏病病毒不同致病型参考株与中国分离株pp24基因的克隆与序列分析[J];病毒学报;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 陈秀蓉;杨成德;贾迎春;;西瓜细菌性果斑病菌的分离鉴定[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(三)[C];2007年
2 谈安群;钟广炎;江东;闫虎斌;王淼;;用抑制性消减杂交法分离兴春椪柑干旱胁迫诱导表达的cDNA[A];中国柑橘科技创新与产业发展战略论坛暨中国柑橘学会2007年年会论文集[C];2007年
3 魏兰兰;谷鸿喜;;16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
4 周兴;张居农;;蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[A];中国奶牛协会2007年会论文集(上册)[C];2007年
5 魏庆宽;李瑾;傅婷霞;柏雪莲;崔勇;王用斌;张佃波;王洪法;付斌;刘玉冰;宰德福;黄炳成;刘克义;韩广东;;抗弓形虫感染DNA疫苗的研究[A];山东预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
6 杨忠义;曹永生;苏艳;刘晓利;李华惠;卢义宣;;中国栽培稻的籼稻和粳稻分类及方法(综述)[A];云南省作物学会2004—2006年优秀论文选集[C];2006年
7 雷楗勇;张莲芬;杨健良;金坚;;人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
8 牛宝龙;翁宏飚;孟智启;;棉铃虫雌性特异性分子标记的筛选及棉铃虫幼虫的性别快速鉴定[A];“蚕业生物技术与家蚕病害控制”高级研讨班、“家蚕生理、病理和生物技术”学术研讨会论文选集[C];2006年
9 王晓泉;焦新安;潘志明;陈祥;吴双;刘晓文;刘秀梵;;1962-2006年鸡白痢沙门氏菌耐药性的演化[A];第15届世界禽病大会、中国畜牧兽医学会2007年学术年会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 温丽敏;移植物抗宿主病:动物模型建立和临床预防方案比较研究[D];第二军医大学;2004年
2 苗红梅;小麦淀粉合成关键酶基因启动子的克隆与特征[D];河南农业大学;2004年
3 张春秀;基于抗原/抗体反应的生物检测技术及其应用研究[D];东南大学;2003年
4 齐力旺;华北落叶松体细胞胚胎发生与遗传转化系统建立的研究[D];中国林业科学研究院;2000年
5 王宏田;牙鲆免疫系统和抗病力的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
6 郑燕芳;抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌细胞株表型和基因调控的影响[D];第一军医大学;2000年
7 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
8 李大力;蜂毒溶血肽及其前体蛋白cDNA的克隆、定点突变和在大肠杆菌中表达的研究[D];大连理工大学;2000年
9 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
10 陈孙孝;白念珠菌钙调蛋白基因(CMD1)缺陷菌株的构建及CMD1功能性基因的初步研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘忠渊;利用毕赤酵母系统表达功能蛋白的研究[D];新疆大学;2004年
2 李军;小鼠严重创伤早期糖皮质激素受体变化及安定-氯胺酮的影响[D];第三军医大学;2002年
3 白彦霞;营养相关基因(fdr3和TaNRT1)功能的进一步研究[D];首都师范大学;2000年
4 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
5 吴振龙;副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克隆、突变研究[D];第一军医大学;2000年
6 李红;HOXA10基因在人子宫内膜的表达、调控及其与不孕的关系[D];第一军医大学;2000年
7 陈祎招;p16基因对胶质瘤细胞生长作用的实验研究[D];第一军医大学;2000年
8 朱杰青;促黄体素释放激素在大肠杆菌中的融合表达及抗原性鉴定[D];南京农业大学;2000年
9 向小宇;粪产碱菌西藏分离株的鉴定[D];南京农业大学;2000年
10 侯玉峰;新城疫病毒F48E8株F基因的克隆及其在鸡痘病毒中的表达和免疫效果检测[D];南京农业大学;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贝锦龙,陈庄,杨林,廖玲,王珣章,蒋宗勇;人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达[J];生物工程学报;2001年03期
2 单安山,王安,徐奇友,石宝明,杜鹃,宋金彩,马玺,王丽娟;植酸酶的特性及其在家禽饲粮中应用的研究 1.微生物植酸酶、植物植酸酶特性的测定与影响因素的研究[J];东北农业大学学报;2001年04期
3 安韩冰,朱祯,李慧芬,吴茜,周兆澜,徐鸿林,徐军望,安利佳,李向辉;基因枪法转化水稻(Oryza sativaL.)获得可育的转抗虫基因水稻再生植株[J];高技术通讯;2001年02期
4 石太渊,杨立国,杜艳艳;玉米体细胞培养中不同基因型和外植体的反应[J];杂粮作物;1999年05期
5 张晚鸣,马立新;土曲霉CCTCCAF93044植酸酶基因的克隆及序列分析[J];湖北大学学报(自然科学版);2001年02期
6 程永前,黄民生,张国莹;白腐真菌对染料脱色及降解过程机理和影响因素[J];环境污染治理技术与设备;2000年06期
7 陈铭,周晓云;固定化细胞技术在有机废水处理中的应用与前景[J];水处理技术;1997年02期
8 黄遵锡,章克昌;植酸酶基础与应用研究概况[J];食品与发酵工业;1999年02期
9 董新姣,周国玲;固定化青霉菌吸附活性艳蓝KN-R的脱色研究[J];中国环境科学;2005年04期
10 王广立,潜忠兴,刘宝先,麻密,林忠平;水稻10kD醇溶蛋白基因克隆、序列分析及对植物百脉根的转化[J];植物学报;1994年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 于新芬;黑曲霉N25植酸酶phyA基因玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2003年
2 张剑英;酸性植酸酶基因的克隆及其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达[D];湖南农业大学;2004年
3 赵述淼;烟熏曲霉植酸酶基因phyA的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];华中农业大学;2004年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 吴坚美;姜金波;;VEGF-C和VEGF-D在胃癌及相关淋巴结组织中表达和临床意义的研究[J];中华肿瘤防治杂志;2007年08期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王建勋;1:应用差别PCR技术研究胃癌中c-erbB-2原癌基因的扩增与胃癌的关系 2:胃癌组织中人乳头瘤病毒感染与胃癌关系的研究[D];内蒙古科技大学包头医学院;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋易楠;李长燕;詹轶群;杨晓明;汪思应;;GATA2分子RNAi慢病毒颗粒的包装制备及表达研究[J];安徽医科大学学报;2011年09期
2 陈豪;李丹;林纳;黄月红;陈志新;王小众;;乙肝病毒X基因慢病毒载体的构建和鉴定[J];福建医科大学学报;2011年03期
3 孙杰;魏学磊;张志伟;马士超;马宝通;赵文君;张金利;;非病毒载体携带Cbfa1诱导成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究[J];天津医药;2011年08期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 龚永生;组织型纤溶酶原激活剂基因逆转录病毒载体靶向溶栓效应[D];华中科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 崔瑛;GM-CSF和BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建[D];青岛大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026