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《癌症》 2005年11期
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小鼠AFPcDNA真核表达载体的构建、表达及体外抗肝癌免疫活性的检测

曾斌  卢放根  刘小伟  羊东晔  方唯意  王健  廖爱军  石巍  
【摘要】:背景与目的:探索肝癌细胞的突变基因产物——具有潜在抗原性的异常蛋白质而无法形成有效免疫原的机理,寻找肝癌的特异性抗原,并在此基础上研制出治疗肝癌的DNA疫苗将对肝癌的免疫学治疗产生积极的影响。本实验构建BALB/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突细胞(dendriticcells,DCs)中表达,并观察其在体外抗肝癌免疫中的作用。方法:采用RT-PCR方法自小鼠肝癌细胞株H22中扩增出具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉分泌性信号肽的AFP2cDNA,将该基因定向插入真核表达载体PEGF-N3中;同时培养经rmGM-CSF、rmIL-4诱导的小鼠骨髓细胞,体外获取大量DCs,脂质体转染PEGF-N3/AFP1、PEGF-N3/AFP2至DCs进行表达、鉴定。将DCs疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养,ELISA方法测定脾细胞γ-干扰素(IFN-γ)分泌活性,51Cr释放法测定脾淋巴细胞的特异性杀伤活性。结果:从H22中克隆到AFP1cDNA和AFP2cDNA,经测序完全正确,所构建的真核表达质粒PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2在小鼠DCs中获得稳定高效表达,其中PEGF-N3/AFP2明显刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)为5.12±1.46,明显高于空质粒组(1.42±0.73)。AFP2/DC疫苗对H22细胞的特异性杀伤活性[(88.15±16.47)%]明显高于空质粒组[(12.72±5.45)%]。结论:成功地构建了真核表达载体PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2,编码去掉分泌性信号肽的PEGF-N3/AFP2转染的DC,能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应。其机制可能为诱导肝癌细胞凋亡。
【作者单位】中南大学湘雅二医院消化内科 中南大学湘雅二医院消化内科 中南大学湘雅二医院消化内科 中南大学湘雅二医院消化内科 湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室 湘雅医学院医学遗传学国家重点实验室 南华大学附一医院消化科 南华大学附一医院消化科
【关键词】肝肿瘤 肝癌细胞株H 甲胎蛋白 信号肽 树突细胞 真核基因表达 小鼠 Cr释放法
【分类号】:R735.7;
【正文快照】:
提高机体抗肿瘤的免疫效应,即加强肿瘤免疫原性、增强免疫效应细胞反应性和提高肿瘤抗原递呈的有效性,是近年来肿瘤免疫研究的方向,其中树突细胞(dendritic cells,D Cs)是体内作用最强的抗原递呈细胞,在抗肿瘤免疫中起着重要的作用。为提高D Cs对肿瘤抗原递呈的有效性,目前已

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 张义国,董子明,杨洪艳,郑智敏,赵明耀,吴皓;小鼠骨髓来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞的融合瘤苗研制[J];河南医科大学学报;1999年01期
2 王征旭,何振平,王鑫,冯东晓,李春海,孔繁华;肝癌、胆管癌IL-2、IFN-γ基因肿瘤疫苗的实验研究[J];中华肝胆外科杂志;2001年06期
3 范强,钟翠平,陈空,王国强,傅继东,吴超群;脂质体转染AFP基因构建树突状细胞肝癌瘤苗及体外活性检测[J];中国免疫学杂志;2002年04期
4 唐朝晖,邹声泉,邱文洪,杨想平,裘法祖;癌细胞裂解物修饰的DC疫苗体外诱导T细胞特异性抗胰癌免疫[J];中国普通外科杂志;2003年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄幼田,赵明耀,杨洪艳,郑智敏,马俊芬,汤黎明,董子明;小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用[J];郑州大学学报(医学版);2002年02期
2 杨洪艳,张义国,董子明,赵明耀,郑智敏,陈宁;肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究[J];河南医科大学学报;1999年01期
3 张义国,董子明,赵明耀,杨洪艳,吴皓,郑光,郑智敏,陈宁;转输树突状细胞疫苗免疫脾淋巴细胞对小鼠骨髓瘤的继承性免疫防治作用[J];河南医科大学学报;1999年01期
4 董子明,张义国,杨洪艳,赵明耀,郑智敏;骨髓树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫预防与治疗的实验研究[J];河南医科大学学报;1999年01期
5 赵明耀,张义国,董子明,杨洪艳,郑智敏,陈宁,黄幼田,郑光;小鼠脾来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用[J];河南医科大学学报;1999年01期
6 朱跃红;曾斌;胡炳强;卢放根;廖爱军;石巍;;小鼠去信号肽AFP/DC疫苗体外抗肝癌免疫活性的检测[J];实用癌症杂志;2006年03期
7 李映红,屈伸;树突状细胞用于肿瘤免疫基因治疗的研究进展[J];咸宁学院学报(医学版);2003年05期
8 黄幼田,董子明,赵明耀,杨洪艳,张义国,郑智敏,马俊芬,汤黎明,陈宁;小鼠骨髓树突状细胞pcDNA3-hCEA转染疫苗的抗瘤作用[J];中国病理生理杂志;2002年11期
9 张书峰,蔡婷,马长路,文小岗,董子明;血源性树突状细胞融合疫苗抗恶性黑色素瘤的应用研究[J];中国医刊;2004年05期
10 周旻,杨冬华;肝癌疫苗的研究现状及进展[J];中华肝脏病杂志;2003年12期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 杨俊文;GPC3融合HBsAg-α抗原决定簇作为锚定性抗乙肝相关性肝细胞肝癌免疫靶标的研究[D];中南大学;2011年
2 康玉;可控性树突状细胞活疫苗诱导抗卵巢癌免疫应答的实验研究[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 曾治中;HA纳米载体介导转hGM-CSF基因的HepG2疫苗诱导PBMC的抗瘤效应观察[D];南华大学;2011年
2 石彦;胃癌患者树突状细胞免疫功能的研究[D];第三军医大学;2002年
3 雷晓;树突状细胞肿瘤疫苗抗胃癌作用的实验研究[D];第三军医大学;2002年
4 郭松佳;人脐血树突状细胞体外培养及免疫功能的研究[D];山西医科大学;2006年
5 郝颖;转染T-bet肝癌细胞瘤苗的制备及其体外抗肿瘤免疫效应研究[D];广州中医药大学;2007年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 王征旭;肿瘤基因工程瘤苗研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);1998年01期
2 王新江,李燕,谷淑燕;特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用[J];中华实验和临床病毒学杂志;1994年04期
3 王建莉,曹雪涛,孔宪涛,章卫平;成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治疗人肝癌的实验研究[J];中华肿瘤杂志;1995年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱跃红;曾斌;胡炳强;卢放根;廖爱军;石巍;;小鼠去信号肽AFP/DC疫苗体外抗肝癌免疫活性的检测[J];实用癌症杂志;2006年03期
2 唐力军;张再重;王瑜;王烈;姚和祥;;小儿肝间叶性错构瘤血肿形成甲胎蛋白高表达1例[J];中国普通外科杂志;2007年07期
3 汤卫锋;;140例肝癌的临床特点分析[J];当代医学;2009年10期
4 李剑锋;李学;赵存彦;李莹;李华琳;金瑞;;原发性肝癌患者外周血生存素检测的意义[J];临床荟萃;2010年06期
5 李玲;郑美蓉;阮幼冰;;血清AFP阴性与阳性肝细胞癌免疫组化的比较性研究[J];临床与实验病理学杂志;2006年01期
6 李晓华;吴开春;樊代明;;肝癌早诊新指标有些以偏概全[J];医学争鸣;2010年02期
7 张峰;;人参皂甙对肝癌介入前后VEGF、AFPh的影响[J];山东医药;2007年13期
8 陈建国;陆建华;张永辉;王金兵;朱健;朱源荣;;甲胎蛋白的现场应用与筛查进展[J];中国肿瘤;2009年08期
9 金思思;吴金明;黄智铭;吴建胜;申苏建;;肝癌靶向性AGAP表达载体构建及生物信息学分析[J];温州医学院学报;2010年02期
10 王在国,李德钧,刘光中,朱尤奇,丁福全,吴万梅,张爱玲;胆汁AFP检测原发性肝癌60例[J];世界华人消化杂志;1997年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 潘丽;雷家林;潘宝龙;孔繁林;林明;刘淑芹;向秀华;;三种血清肿瘤标志物检测在原发性肝癌诊断中的意义[A];玉溪市第八届检验医学学术年会暨科技成果推广会论文汇编[C];2005年
2 洪愉;刘平;周平;;兔VX2肝肿瘤及其转移模型的~(18)F-FDG显像观察[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
3 陈;翟笑枫;万旭英;李瑾;凌昌全;;华蟾素注射液治疗中晚期原发性肝癌的临床观察[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
4 丁红;王文平;黄备建;齐青;魏瑞雪;徐智章;;实时灰阶超声造影和螺旋CT诊断肝肿瘤的比较研究[A];中华医学会超声医学新进展学术会议论文汇编[C];2004年
5 郑传胜;梁斌;王勇;周国锋;梁惠民;赵辉;夏向文;熊付;冯敢生;;经导管动脉栓塞对兔VX2肝肿瘤HIF-1α表达的影响[A];第十一次全国中西医结合影像学术研讨会暨全国中西医结合影像学研究进展学习班资料汇编[C];2010年
6 李辉娥;张洁;苏晓萍;张文萍;朱冬香;王梦云;;冷循环超能射频损毁治疗肝肿瘤的护理[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2002年
7 霍苓;陈敏华;严昆;张晖;杨薇;戴莹;;胆囊旁肝肿瘤射频治疗方法探讨[A];中华医学会超声医学新进展学术会议论文汇编[C];2004年
8 齐青;王文平;魏瑞雪;丁红;黄备建;;SonoVue彩色多普勒超声造影在诊断肝肿瘤中的应用[A];中华医学会超声医学新进展学术会议论文汇编[C];2004年
9 梁斌;郑传胜;王勇;周国锋;梁惠民;赵辉;夏向文;熊付;冯敢生;;经导管动脉栓塞对兔VX2肝肿瘤HIF-1α表达的影响[A];2010湖北省肿瘤介入治疗学术大会论文汇编[C];2010年
10 刘允怡;;肝肿瘤的检查和分期[A];第八届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 方彤 杨国利 王伦;右肝巨大肝肿瘤成功切除[N];健康报;2003年
2 张献怀;经脐单孔腹腔镜切除巨大肝肿瘤术成功[N];健康报;2010年
3 张艳敏 唐发发 孙雨;扎根国土 引领国际甲胎蛋白研究[N];科技日报;2011年
4 张献怀;解放军总医院一附院微创切除巨大肝肿瘤[N];中国医药报;2010年
5 陈金伟;怎样看甲胎蛋白化验单[N];家庭医生报;2006年
6 冯琳;一手术禁区巨大肝肿瘤被切除[N];中国医药报;2003年
7 张禹;甲胎蛋白的自述[N];健康报;2003年
8 周玉;早期反映肝脏肿瘤的指标:甲胎蛋白[N];医药养生保健报;2005年
9 杨昆;神奇的甲胎蛋白[N];中国知识产权报;2000年
10 邹波;甲胎蛋白升高是否就是肝癌[N];家庭医生报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 董恂玮;瘦素受体在特发性血小板减少性紫癜患者树突细胞的表达[D];中国协和医科大学;2008年
2 许荣华;外源性导入抑癌基因FHIT对肝癌细Hep3B生长的影响[D];华中科技大学;2006年
3 党一兵;壳寡糖影响小鼠及其脾脏CD11c~+树突细胞免疫功能的相关研究[D];大连医科大学;2011年
4 李工博;遗传改造的骨髓来源树突细胞对her2/neu过表达肿瘤的预防和治疗研究[D];中南大学;2010年
5 邹晓娟;超声引导经皮激光联合无水乙醇消融兔VX2肝肿瘤的实验研究[D];第四军医大学;2012年
6 梁旻;针对原发性肝癌的新型重组腺病毒基因治疗[D];复旦大学;2004年
7 李汛;甲胎蛋白影响乙肝相关性肝癌发生的分子作用机制[D];兰州大学;2010年
8 兰英华;小鼠甲胎蛋白与结核分枝杆菌热休克蛋白70基因融合疫苗抗肝癌免疫研究[D];重庆医科大学;2004年
9 曲学彬;MEF来源的间充质干细胞通过分泌IL-10诱导HPC分化为调节型树突细胞[D];北京协和医学院;2012年
10 单亚明;CdTe量子点标记靶向多肽及其介导APX模拟酶抗心肌细胞过氧化损伤研究[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 史芳;反应停对肝癌患者介入前后血清VEGF影响的相关研究[D];南昌大学;2009年
2 曾燕荣;肝肿瘤血管的多普勒超声检测与病理微血管密度对比研究[D];河北医科大学;2002年
3 曾聪;基质金属蛋白酶9对肝癌细胞TNFRⅠ受体的表达及释放的影响[D];南方医科大学;2009年
4 李文昌;经导管肝动脉化学栓塞术联合脾内注射干扰素治疗大鼠移植性肝肿瘤的实验研究[D];青岛大学;2001年
5 段润卿;转移性肝肿瘤血供及介入治疗中疗效的评价[D];山西医科大学;2005年
6 荆良;肝海绵状血管瘤的治疗探讨[D];第二军医大学;2005年
7 徐瀚峰;雌二醇、uPA及其受体在HCC生物学行为的变化及意义[D];山东大学;2005年
8 夏红;6,8-二—三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素活化PPARγ诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡研究[D];南华大学;2007年
9 潘泽亚;肝门区肿瘤手术并发症的回顾性分析及防治[D];第二军医大学;2004年
10 田志远;~(125)I粒子组织间植入治疗小鼠移植性肝细胞癌的实验研究[D];青岛大学;2006年
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