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《中国新药杂志》 2009年11期
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CRE-decoy ODN对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞中相关信号分子的影响

段立华  张瑾  
【摘要】:目的:以环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(Cyclic-AMP response-element-binding protein,CREB)为靶点,体外合成CRE转录因子诱骗寡核苷酸(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoy ODN),观察其对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH)细胞cAMP含量、磷酸化CREB-1及CREB-1表达的影响,为在分子水平上寻找阿片类依赖的干预靶点提供实验依据。方法:体外合成CRE-decoy ODN,以DOTAP(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium propane)为转移介质,将CRE-decoy ODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细胞共同孵育,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE-decoy ODN与转录因子CREB结合的序列特异性;采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE-decoy ODN细胞摄取;放射免疫分析法(RIA)检测细胞cAMP含量;Western blot检测CREB-1及磷酸化CREB-1表达。结果:单纯吗啡组较生理氯化钠溶液对照组细胞cAMP水平显著升高(P0.05),单纯CRE-decoy ODN组与生理氯化钠溶液对照组无明显差异(P0.05),但能明显抑制吗啡及纳络酮组的cAMP水平(P0.05);单纯吗啡组与生理氯化钠溶液对照组比较,磷酸化CREB-1表达明显增高(P0.01),吗啡+纳络酮组较单纯吗啡组轻度降低,与对照组比较仍有显著差异(P0.01);CRE-decoyODN可抑制单纯吗啡组及吗啡+纳络酮组磷酸化CREB-1表达明显增高(P均0.05)。结论:CRE-decoyODN可抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断引起SK-N-SH细胞cAMP和磷酸化CREB表达的升高。

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