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基质细胞衍生因子1α修饰促进大鼠脂肪干细胞迁移能力的体外实验研究

梁至洁  黄东琳  张木子  易晓林  吴芳晓  朱丹丹  宁艳  甘慧敏  黎洪棉  
【摘要】:目的通过使用腺病毒构建基质细胞衍生因子1α(stromal cell-derived factor 1α,SDF-1α)过表达的大鼠脂肪干细胞(rat adipose derived stem cells,rADSCs),研究SDF-1α修饰促进rADSCs迁移能力的效果。方法取6周龄SPF级SD大鼠脂肪组织分离培养rADSCs,行细胞形态观察、多向分化(成骨、成脂、成软骨)及流式细胞仪鉴定。取第3代rADSCs,采用Transwell细胞迁移实验观察和筛选出优化rADSCs迁移能力的外源性SDF-1α最佳刺激浓度;通过观察转染后细胞状态和荧光表达情况筛选出rADSCs的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。然后取第3代rADSCs分为4组,A组为单纯rADSCs;B组于rADSCs中加入最佳浓度SDF-1α共培养;C组为携带绿色荧光蛋白的腺病毒载体(recombinant adenovirus-mediated green fluorescent protein,AdvGFP)以最佳MOI感染rADSCs;D组采用Adv-GFP-SDF-1α过表达腺病毒以最佳MOI感染rADSCs。通过细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法、Transwell细胞迁移实验检测内外源性SDF-1α优化rADSCs增殖和迁移的能力。结果经细胞形态观察、多向分化检测以及流式细胞仪检测显示所培养细胞为rADSCs。经筛选,优化rADSCs迁移能力的外源性SDF-1α最佳刺激浓度为12.5 nmol/L;Adv-GFP腺病毒最佳MOI为200,Adv-GFPSDF-1α过表达腺病毒最佳MOI为400。CCK-8法和Transwell细胞迁移实验检测示,与A、C组比较,B、D组均可显著提高rADSCs的增殖、迁移能力(P0.05);D组提高rADSCs迁移能力的作用弱于B组,但促进rADSCs增殖能力的作用强于D组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 SDF-1α修饰rADSCs可明显促进其增殖、趋化性迁移能力,可优化ADSCs在组织再生、创伤修复治疗中的疗效。

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