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《中国兽医学报》 1997年06期
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核基质附着区(MAR)调控的人胰岛素样生长因子(hIGF-1)转基因兔的制备

葛宝生  朱裕鼎  陈永福  沈孝宙  安民  
【摘要】:用EcoRI+HindⅢ双酶解含鸡α-珠蛋白基因5′端核基质附着区(MAR)、小鼠金属硫蛋白基因启动子(MT-1)和人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的pMTSMCAG质粒,0.6%琼脂糖凝胶电泳,玻璃乳回收纯化MAR/MT/hIGF-1片段(3.9kb),用该片段制备转基因兔。利用水平显微注射系统注射1-细胞兔胚胎468枚,移植到36只受体兔,有8只妊娠,共产下19只活仔兔。采仔兔耳样提取基因组DNA,应用PCR技术分析其外源基因整合情况,获得8只阳性兔(显示出约600bp外源DNA条带)。再对8只阳性兔的PCR产物进行Southern印迹杂交,得到5只整合有MAR/MT/hIGF-1外源基因的转基因兔,转基因整合率为26.3%(5/19)。用1只阳性转基因公兔(502号)繁殖了6窝,共获得42只仔兔。采仔兔耳样提取基因组DNA后,如上用PCR分析和做Southern印迹杂交,F1代中有5只整合有MAR/MT/hIGF-1融合基因。

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