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《中国兽医学报》 2010年10期
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SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立及应用

王金良  郭显坡  魏凤  沈志强  
【摘要】:根据GenBank登录的猪流行性腹泻病毒株FJ473395的M基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出182 bp的片段。产物经回收与pMD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,产物Tm在85~85.5℃之间,灵敏度为5.875拷贝/μL,特异性和重复性较好。本试验建立了检测PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,为该病的早期诊断,并定量分析PEDV感染程度奠定了基础。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 周斌;;实时荧光定量PCR技术及在猪重大疫病中的诊断应用[J];猪业科学;2011年08期
2 田莉莉;李林;;荧光定量PCR技术在猪病毒病诊断上的应用[J];中国农学通报;2011年26期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 袁健;东海三种重要赤潮藻荧光定量PCR检测技术的建立和应用[D];中国海洋大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 肖博仁;湖南地区猪流行性腹泻病毒的分子流行病学和血清流行病学调查[D];湖南农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 余丽芸,侯喜林;流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建[J];动物医学进展;2005年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
5 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
6 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
7 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
8 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究[J];安徽农业科学;2004年02期
9 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
10 王乐义,马洪;自制和进口试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体的比较研究[J];安徽农业科学;2005年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
6 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
7 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
8 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
9 曾政;任远志;叶昭辉;凌洪权;杨泽林;熊仲良;;重庆市2009年犬狂犬病检测及流行病学调查[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
10 薛传华;何林;赵志模;;朱砂叶螨β-actin基因cDNA片段的克隆及实时荧光定量PCR方法的建立[A];庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
7 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
9 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
10 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
4 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
5 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
6 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
7 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
8 于占松;YFM合剂对莱芜黑猪麻醉的试验研究[D];山东农业大学;2009年
9 巩艳艳;抗体免疫选择压作用下新城疫病毒HN基因和F基因的变异[D];山东农业大学;2010年
10 裴兰英;HSP_(70)与MDV肿瘤的发生发展相关性研究[D];山东农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于晓龙;;猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染的调查[J];安徽农学通报;2007年14期
2 李军;谢宇舟;禤雄标;陈泽祥;杨威;马春霞;胡帅;彭昊;许力干;谢永平;潘艳;;副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用[J];安徽农业科学;2011年06期
3 孙东波;冯力;陈建飞;时洪艳;佟有恩;刘胜旺;陈洪岩;;猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位区的鉴定[J];病毒学报;2007年03期
4 孙彦伟;刘建营;徐维加;田云;王晶钰;宋长绪;;荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒[J];动物医学进展;2007年08期
5 田小艳;孙华;邓雨修;苏润环;王东东;宋延华;;3种致猪腹泻病毒的多重RT-PCR检测[J];动物医学进展;2009年09期
6 任夫波;张志;张丽丽;杨若松;韩艳;张燕霞;李晓成;单虎;;猪瘟病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];动物医学进展;2011年05期
7 陈强;曾丽莉;俞伏松;叶鼎承;杨金先;李艳虹;宋铁英;;规模化猪场仔猪腹泻4种病原的感染情况调查[J];福建农业学报;2010年01期
8 李淑冰,李惠珍,许旭萍;贝毒素的研究现状及产生源探究[J];福建水产;2000年01期
9 龙华;杜琦;;福建沿海米氏凯伦藻赤潮的初步研究[J];福建水产;2005年04期
10 韩俊英,曾瑞萍;荧光定量PCR技术及其应用[J];国外医学.遗传学分册;2000年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王萃瑜;猪流行性腹泻病毒部分S基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[D];吉林农业大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 李娇;沈志强;祖立闯;;猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法研究进展[J];动物医学进展;2012年05期
2 李娇;王金良;沈志强;;荧光定量PCR检测方法在猪瘟诊断上的应用研究进展[J];养猪;2012年06期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘惠莉 ,陆承平;冠状病毒基因组及其编码蛋白[J];动物医学进展;2004年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周丽;陈生雷;刘艳霞;张华春;闫艳丽;;猪流行性腹泻研究概况[J];今日畜牧兽医;2007年10期
2 王仕峰;李全福;熊世荐;;猪流行性腹泻的“饥饿”疗法实践[J];上海畜牧兽医通讯;2007年06期
3 李立;曹新锋;夏海;;猪流行性腹泻的综合防治[J];畜牧兽医科技信息;2009年11期
4 任月仙;;猪流行性腹泻的诊断与防治[J];养殖技术顾问;2010年09期
5 杨臣,王殿瀛,邢德坤;猪流行性腹泻病毒在人工感染仔猪体内的分布[J];中国兽医学报;1986年01期
6 蒋晓峰;居锦霞;;猪流行性腹泻的防治[J];畜禽业;2009年11期
7 王文斌;;冬季猪流行性腹泻的诊断和防治[J];上海畜牧兽医通讯;2010年03期
8 宋维平,徐福洲,王金洛,杨兵,赖平安,孟彦妮;抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体治疗效果研究[J];华北农学报;2003年01期
9 冯双球;黄关华;曹建平;李安安;范沅;;抗胆碱药治愈猪流行性腹泻128例临床报告[J];湖南畜牧兽医;2006年04期
10 沈小根;查德忠;陈旦华;陈雪文;金根兴;;浅谈猪流行性腹泻及其防治[J];上海畜牧兽医通讯;2009年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 倪艳秀;何孔旺;俞正玉;郭蓉利;吕立新;陈兆霞;;检测猪流行性腹泻病毒的RT-PCR方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
2 江小工;徐兵;许文娟;李冰;;实时荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品的构建[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
3 王金洛;宋维平;徐福洲;杨兵;赖平安;王琴;孟燕妮;;抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体(PEDV-IgY)及其特性研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
4 孙竞;阴继霞;许文娟;周荣;孟凡义;刘启发;徐丹;周淑芸;李扬秋;;建立实时荧光定量PCR检测TREC的方法研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
5 吴云成;蔡友庆;赵永波;费俭;;小鼠Nurrl基因实时荧光定量PCR检测方法的建立[A];2005年中国神经心理学学术会议论文集[C];2005年
6 王侠;钟金城;陈思;廖伟旋;;犏牛HSFY2基因实时荧光定量PCR方法的建立[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 袁秀芳;刘邓;徐丽华;王一成;;猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
8 黄俊明;李文立;胡帅尔;杨杏芬;陈海珍;谭剑斌;;TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用[A];中国毒理学会放射毒理专业委员会第七次、中国毒理学会免疫毒理专业委员会第五次、中国环境诱变剂学会致突专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致畸专业委员会第二次、中国环境诱变剂学会致癌专业委员会第二次全国学术会议论文汇编[C];2008年
9 谢芝勋;黄琦;庞耀珊;刘加波;邓显文;谢志勤;谢丽基;;多重实时定量PCR鉴别诊断猪传染性胸膜肺炎和猪圆环病毒Ⅱ型方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
10 史利军;尹惠琼;吕茂民;孙宇;章金刚;;西尼罗病毒荧光定量RT-PCR检测技术[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 林苗 黄运生 高彦生;SARS与动物冠状病毒[N];中国国门时报;2003年
2 ;国内外同类技术综合比较[N];中国质量报;2003年
3 李雪墨;德国两种非典诊断技术进入临床试验[N];医药经济报;2003年
4 刘俊辉;猪腹泻时该咋办[N];湖北科技报;2002年
5 俞正玉 林继煌;猪流行性腹泻[N];江苏农业科技报;2004年
6 樊小业;诊断试剂市场硝烟乍起[N];医药经济报;2003年
7 李连任;规模化猪场病毒性腹泻的防治[N];中国畜牧报;2004年
8 冯力 张晓鹏 记者 李丽云;二联灭活苗5年创效超10亿[N];科技日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙立;抗戾饮对呼吸道冠状病毒感染模型影响的实验研究[D];广州中医药大学;2006年
2 谢韶琼;灵芝多糖抗皮肤衰老及相关基因表达的研究[D];第二军医大学;2007年
3 牛东升;立氏立克次体外膜蛋白B基因的应用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
4 马焕先;抗人FXYD3单克隆抗体的制备应用及蓖麻毒素细胞毒作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
5 孙东波;猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位鉴定及受体结合域的初步筛选[D];中国农业科学院;2008年
6 苏建青;犬瘟热免疫层析试纸及荧光定量PCR诊断方法的建立与评价[D];吉林大学;2008年
7 李士军;p53促凋亡刺激蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究[D];大连医科大学;2009年
8 杨亦桦;棉铃虫对拟除虫菊酯氧化代谢抗性的生化与分子机理[D];南京农业大学;2005年
9 卢丽萍;脊髓性肌萎缩症SMN基因检测及其表达的研究[D];中国医科大学;2005年
10 陈俊杰;热休克蛋白47在病理性瘢痕生成中的作用机制的探讨[D];四川大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴锋;HBV携带者血清HBVDNA及其标志物与肝组织cccDNA相关性的研究[D];中国医科大学;2009年
2 周侠;抗乙型肝炎病毒药物的筛选和研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
3 王尊松;放大内镜下胃黏膜微细结构改变与病理组织学和hTERTmRNA表达的关系及其意义[D];山东大学;2005年
4 黄亮;Real Time PCR评价血液制品中指示病毒灭活去除效率的模型建立[D];西北大学;2005年
5 季丙元;载体介导siRNA体内抑制鼠乳腺癌细胞KLK6基因表达及功能研究[D];山东师范大学;2006年
6 尚巍;实时定量PCR检测复发性阿弗他溃疡患者中的人类疱疹病毒5型和8型的潜伏[D];大连医科大学;2007年
7 徐瑶;湖泊浮游植物动态及微囊藻监测技术研究[D];南京师范大学;2007年
8 孙健;Survivin mRNA在膀胱移行细胞癌患者手术前后尿脱落细胞中的表达及意义[D];苏州大学;2008年
9 周新军;肝细胞癌中缺氧诱导因子-1α的表达及临床意义[D];苏州大学;2008年
10 马小鑫;祛风解痉类方药干预过敏性哮喘小鼠arg-1基因调控研究[D];北京中医药大学;2008年
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