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《中国兽医学报》 2009年04期
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饲养层细胞的接种密度对分离培养胚胎干细胞的影响

赵晶  董雅娟  柏学进  靳亚平  张廷龙  封纪武  
【摘要】:建立有效的昆明白小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)饲养层培养体系,用于分离和培养小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的研究。(1)取怀孕14.5 d昆明白小鼠胎儿分离成纤维细胞,利用体外培养体系分离传代,选取生长旺盛并且已纯化的P3代的MEF,经丝裂霉素处理后,用细胞计数板计算活细胞数,分别按1×104、1×106、1×108/mL密度接种,制备饲养层,观察不同密度饲养层的生长状况。(2)取怀孕4 d的昆明白小鼠囊胚,接种在不同密度饲养层上。观察不同密度饲养层上囊胚、ICM及ES细胞的克隆生长情况。结果显示:囊胚在密度为1×106/mL的饲养层上,贴壁率和ICM孵出率分别为(97.0±3.606)%和(96.3±2.887)%,显著高于其他2组;密度为1×106/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率高于密度为1×104/mL(差异极显著,P0.01)和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率(差异显著,P0.05);而1×104/mL饲养层和1×108/mL饲养层上的ES细胞克隆形成率差异不显著(P0.05)。结果表明:以1×106/mL密度接种的MEF作为饲养层,最适合用于分离培养昆明白小鼠ES细胞,有利于囊胚的发育,ICM的增殖,促进ES细胞的增殖,并起到抑制其分化的作用。

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 刘民,李柏青;两种来源小鼠胚胎干细胞的分离与培养[J];蚌埠医学院学报;2002年02期
2 秦茂林,蔡文琴,姚忠祥;昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定[J];第三军医大学学报;2001年09期
3 刘登华,肖文伍,陈红,张苏明;小鼠胚胎干细胞体外分离培养影响因素的实验研究[J];华中科技大学学报(医学版);2004年06期
4 郭志林;王新庄;王木;张涌;王轶敏;;影响昆明小鼠和BALB/c小鼠胚胎干细胞分离、克隆、传代的若干因素[J];中国兽医学报;2006年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周振明,桑润滋;胚胎干细胞分离和克隆影响因素的研究进展[J];黄牛杂志;2001年04期
2 刘善荣,刘厚奇,汤淑萍,惠宁,冀凯宏,蒋正,戚中田,冯根生;不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养[J];第二军医大学学报;2003年09期
3 郝福星;冒海银;周春炎;;胚胎干细胞及其应用[J];动物医学进展;2007年11期
4 文道源,李舒梅,严宜明,曾祥云,罗晓婷,陈水亲,熊跃玲,叶金花,汤军桥,曾爱萍,赵清明;人角膜缘干细胞初步建系研究[J];赣南医学院学报;2004年01期
5 何少健,陈维平,邝晓聪;成体大鼠的骨髓间充质干细胞分离和体外培养的初步研究[J];广西医科大学学报;2002年03期
6 梁自乾,毛庆龙;电动磨痂治疗深Ⅱ度烧伤创面的前景[J];广西医学;2004年06期
7 韩建永,桑润滋,常万存;哺乳动物PGCs用于多能性干细胞培养的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2001年05期
8 杨锋,张世馥;胰岛干细胞研究进展[J];基础医学与临床;2002年05期
9 赵丹,张玉兰,张新平;小鼠囊胚内细胞团的生长行为[J];基础医学与临床;2004年02期
10 陈永珍,朱旻,张苏,李芳;人胚胎生殖干细胞的分离和体外培养[J];解剖学杂志;2005年03期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陆群;牙髓干细胞分离培养鉴定和体外诱导分化的研究[D];第四军医大学;2002年
2 周欣;分离615小鼠ES细胞集落及诱导ES细胞定向分化为神经细胞的实验研究[D];中国医科大学;2002年
3 董晓;猪胚胎干细胞(EG)建系影响因素的研究[D];中国农业大学;2003年
4 宋晓平;小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究[D];西北农林科技大学;2003年
5 章恩明;胚胎干细胞同步化处理、神经分化及Aβ对分化神经元NFκB通路的影响[D];浙江大学;2005年
6 羊书勇;富含血小板血浆应用于骨组织工程的研究[D];第四军医大学;2005年
7 王彤;胚胎干细胞的分离培养和诱导分化为神经细胞的实验研究[D];中国医科大学;2005年
8 刘永刚;人EG细胞分离、培养及其定向诱导为造血细胞的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
9 曹鸿国;小鼠体细胞克隆胚的ES细胞研究[D];西北农林科技大学;2005年
10 王红梅;骨髓间充质干细胞的生物学特性和靶向烫伤创面愈合的研究[D];南昌大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周家喜;马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒及其亲本驴强毒转录调控的比较研究[D];中国农业科学院;2001年
2 王智卿;体外诱导大鼠骨髓单个核细胞向肝系细胞分化的实验研究[D];郑州大学;2002年
3 王晓;体外诱导人骨髓间充质干细胞亚群—CD45~-HLA-DR~-细胞向肝细胞样细胞分化的研究[D];郑州大学;2003年
4 任少强;人表皮干细胞的分离和鉴定研究[D];第三军医大学;2002年
5 韩兵;原始生殖细胞来源的人胚胎干细胞分离、培养与鉴定[D];重庆医科大学;2004年
6 毛庆龙;电动磨痂治疗深Ⅱ度烧伤创面的临床研究[D];广西医科大学;2004年
7 燕海峰;家鸡囊胚细胞嵌合体技术研究及应用[D];湖南农业大学;2004年
8 金立方;小鼠胚胎干细胞和胚胎生殖细胞的分离培养[D];西北农林科技大学;2004年
9 葛秀国;牛和山羊胚胎生殖细胞的分离与培养[D];西北农林科技大学;2004年
10 黄兵;通络救脑注射液促进去皮层血管大鼠室管膜下区(SVZ)细胞增殖、分化和迁移作用的研究[D];北京中医药大学;2005年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 葛秀国;徐小明;华进联;杨继建;窦忠英;;牛胚胎生殖细胞的分离与培养[J];畜牧兽医学报;2005年12期
2 何志旭,黄绍良,李予,张清学;人胚胎干细胞系的初步建立[J];中华医学杂志;2002年19期
3 郭志勤,王安江,高康军;利用CIDR处理供体牛的超数排卵效果[J];草食家畜;2001年S2期
4 孙国杰,桑润滋,韩建永,金东航,田树军,周振明,李俊杰;山羊类胚胎干细胞的分离、克隆研究[J];河北农业大学学报;2003年03期
5 田保中;汪生鹏;王建南;陆长德;左保齐;白伦;;类蜘蛛丝丝素蛋白SPF198在毕赤酵母中的分泌表达[J];蚕业科学;2006年02期
6 王晓玉,柳增善,任洪林;“生物钢性及弹性蛋白”——蜘蛛丝研究进展[J];第四军医大学学报;2002年S1期
7 李俊杰,桑润滋,周艳华,杨庆华;注射促排3号对荷斯坦奶牛情期受胎率的影响[J];黑龙江动物繁殖;2005年03期
8 刘辉芬;李维;王宇;蒋平;郭聪;;蜘蛛拖牵丝蛋白基因转家蚕表达质粒的构建[J];湖南大学学报(自然科学版);2006年05期
9 熊吉信;刘小春;杨春江;刘兆轩;;小鼠胚胎干细胞饲养层的制备及两种不同饲养层的比较[J];江西医学院学报;2006年04期
10 窦忠英,徐小明,华进联;牛胚胎干细胞建系研究进展及存在问题[J];农业生物技术学报;2003年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 杨继建;山羊胚胎干细胞的分离与克隆[D];西北农林科技大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陈德英,王海燕,刘建军;利用内源性碱性磷酸酶显示胆小管[J];解剖科学进展;2000年04期
2 杜忠伟,丛笑倩;胚胎干细胞体外分化的研究进展[J];细胞生物学杂志;1998年03期
3 尚克刚,李子玉,吴鹤龄;建立小鼠胚胎多能干细胞系(ES细胞系)的几个主要影响因素[J];遗传学报;1992年06期
4 孟国良,汤富酬,尚克刚,薛友纺;5个品系小鼠胚胎干细胞系建立的方法学比较(英文)[J];遗传学报;2003年10期
5 曹鸿国,张涌;小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离[J];自然科学进展;2005年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孔庆然;朱江;黄波;郇延军;王峰;石永乾;刘仲凤;武美玲;刘忠华;;TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达[J];遗传;2011年07期
2 于永生;王晓阳;朴庆林;罗晓彤;金海国;;绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达[J];中国畜牧兽医;2011年06期
3 朱彦宾;龙川;冯冲;潘登科;罗玉柱;;Scriptaid处理可提高近交系五指山猪克隆胚胎的发育能力和克隆效率[J];基因组学与应用生物学;2011年03期
4 腊晓琳;田海清;蔡霞;;高效制备昆明鼠胚胎成纤维细胞饲养层[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 金立方;李吉霞;包华琼;王新庄;;昆明白小鼠胚胎干细胞分离与克隆[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 周燕华;贾秀芬;刘慧雯;金明顺;;曲古抑菌素A对小鼠供体细胞组蛋白H3(Lys9)乙酰化水平的影响[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 马玉珍;刘东军;周平;阎真;旭日干;;利用体细胞克隆技术产生转基因绵羊胚胎的研究[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
4 刘思国;陈建泉;陈娟;俞慧清;徐旭俊;蔡引凤;吴友兵;胡大为;吕小东;徐少甫;成国祥;;乳中高表达人溶菌酶转基因山羊的制备[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
5 王超;许宝山;金世英;雷蕾;付茂勇;宋晓明;张美佳;周波;洪海燕;夏国良;;RNA干扰实验证明FSH诱导小鼠卵丘细胞分泌促减数分裂甾醇(MAS)参与卵母细胞减数分裂成熟[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
6 ;胚胎学[A];中国解剖学会2008年年会论文文摘汇编[C];2008年
7 袁玉国;安礼友;杨廷佳;于宝利;赵俊辉;曹玉娟;成勇;;含双筛选基因的人乳铁蛋白乳腺特异表达载体的构建及其表达[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
8 曹陈冲;徐元诚;徐建平;许娟娟;;哺乳动物核移植技术的发展史[A];江苏省性学会第六次学术会议论文集[C];2006年
9 衣少莉;李建华;崔胜;;类固醇激素对小鼠1-细胞胚胎体外发育和囊胚移植后的影响[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
10 吴侠;吴应积;罗奋华;于海泉;旭日干;;大鼠精原干细胞的分离及体外培养的研究[A];第十届全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 通讯员 刘旭林 记者 刘传书;华大基因老龄动物体细胞克隆技术获新突破[N];科技日报;2011年
2 实习生辛文娟;克隆技术:明天向何方[N];科技日报;2002年
3 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
4 记者 谭大跃 通讯员 刘旭林;华大基因妙手生“猪”“猪坚强”繁衍下一代[N];深圳特区报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张力;猪Nanog基因在成纤维细胞与克隆胚胎中的过表达研究[D];东北农业大学;2011年
2 崔龙波;不同年龄小鼠生发泡互换及改变核质比对卵成熟和发育的影响[D];东北农业大学;2003年
3 徐小明;胎猪骨髓间充质干细胞核移植及核移植胚胎干细胞的分离[D];西北农林科技大学;2006年
4 郭旭东;绒山羊转胰岛素样生长因子Ⅰ基因体细胞核移植胚胎的制备[D];内蒙古大学;2008年
5 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
6 田江天;转基因兔制备技术及影响因素研究[D];吉林大学;2011年
7 白晓红;卵母细胞体外成熟培养的研究[D];天津医科大学;2002年
8 付博;猪体细胞核移植重构胚构建的影响因素研究[D];东北农业大学;2010年
9 殷玉鹏;梅花鹿体细胞克隆胚胎构建及Ercc6l基因表达的研究[D];吉林大学;2012年
10 王鸿;胚胎干细胞的分离及克隆[D];大连理工大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵晶;昆明小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定[D];西北农林科技大学;2008年
2 黄兰兰;脂质体介导hALR转染绵羊胎儿成纤维细胞的研究[D];石河子大学;2007年
3 梁琳;昆明白小鼠胚胎干细胞建系方法及相关特性研究[D];内蒙古大学;2006年
4 李恩书;昆明白小鼠胚胎干细胞系及转基因小鼠模型的建立[D];浙江理工大学;2010年
5 丛银峰;昆明小鼠卵母细胞孤雌激活及去核的研究[D];西北农林科技大学;2006年
6 张玉影;小鼠和兔种间体细胞核移植研究[D];华南师范大学;2007年
7 林慧;稳定整合人乳铁蛋白cDNA山羊胎儿成纤维细胞的制备[D];西北农林科技大学;2008年
8 王轶敏;昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养[D];西北农林科技大学;2008年
9 冯冲;体细胞克隆转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪[D];甘肃农业大学;2009年
10 刘君;线虫fat-1基因在家兔胎儿成纤维细胞中的表达[D];四川农业大学;2011年
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