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《中国兽医学报》 2003年01期
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犬2型腺病毒E3区缺失性表达载体的构建及外源基因表达

邱薇  扈荣良  夏咸柱  范泉水  黄耕  张守峰  
【摘要】:为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒 (canim e adenovirus,CAV) E3区缺失性表达载体 ,在克隆的 E3区两末端设计并合成了 2对突变引物 ,在引物中分别引入 1个 Bgl 酶切位点 ,以 p BE3质粒为模板 ,经 2次点突变后 ,得到含有 2个 Bgl 位点的重组质粒 p BE3M。该质粒经 Bgl 酶切后自连得到 E3区缺失的质粒 p BE3Δ。在 p BE3Δ质粒的 Bgl 位点加入接头后 ,产生含多个酶切位点的质粒 p BE3L,经相应的酶切鉴定 ,证明突变、缺失和接头连接正确后 ,利用 p BE3L 分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒 ,并分别进行转染以检测其表达。结果显示 ,p BE3L CGFP质粒在转染 DK细胞后 ,于 36 h即可观察到荧光 ,72~ 96 h无明显差别 ,传 3代后仍可见表达荧光的细胞 ;而 p BE3L GFP质粒转染 DK细胞后经检测无表达。结果表明 ,构建的 E3区缺失性载体不能利用 E3区自身的启动子进行目的基因的表达 ,外源性启动子的加入是必要的。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 牛建强,夏咸柱,扈荣良,张守峰,黄耕;狂犬病毒糖蛋白基因-腺病毒E3区缺失转移表达载体的构建及表达[J];中国生物制品学杂志;2005年04期
2 凌宗帅,温书坤,刘友清,张太翔;犬Ⅰ型腺病毒的分子生物学研究进展[J];中国兽医杂志;2005年08期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李永清;禽流感病毒M2基因克隆、表达及其重组马立克氏病病毒的构建[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 胡志敏;猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因重组犬腺病毒2型活载体疫苗的基础研究[D];新疆农业大学;2006年
2 刘燕玲;犬传染性肝炎病毒IX基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2007年
【共引文献】
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1 牛永东,许丽艳,李恩民;酵母单杂交诱饵质粒pHis-3NF和pLacZ-3NF的构建与鉴定[J];癌变.畸变.突变;2003年01期
2 李涛,石年,吴又桐,周丽,董洁,王素青,陈亮;Bcl-2在溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡机制中的作用[J];癌变.畸变.突变;2004年05期
3 蒋超,卿晨,蒙凌华,丁健;灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡[J];癌症;1999年06期
4 田芳,李友军,陈主初,何春梅,邓燕飞,袁建辉,段朝军;染色体3p14.2区域一个与鼻咽癌呈负相关EST的鉴定[J];癌症;2000年02期
5 彭少华,吴德昌,李刚,项晓琼,楼铁柱,赵永良;Annexin Ⅰ在α粒子转化细胞及肺癌组织中高表达[J];癌症;2000年06期
6 彭少华,吴德昌,nic.bmi.ac.cn,李刚,项晓琼;Annexin Ⅰ基因转染对BEP2D细胞生长的影响[J];癌症;2000年07期
7 邓燕飞,田芳,杨新明,谢鼎华,何执鼎,卢永德,邵细芸,陈主初;鼻咽癌组织中FHIT基因异常表达的研究[J];癌症;2000年10期
8 田芳,陈主初,段朝军,何春梅,曾平耀,关勇军,潘乾,陈永恒,夏家辉;染色体3p14.2-14.3区域一个与鼻咽癌相关新基因的克隆[J];癌症;2000年11期
9 张洪涛,张春燕,杨秋格,杨学惠;银染mRNA差异显示方法的建立和二次扩增参数优化[J];癌症;2001年03期
10 范云霞,赵玫,黄常志,茆灿泉,杜菲,周纯;反义HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应[J];癌症;2001年07期
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3 蔡大川;1、整体重组酵母活菌治疗性疫苗抗HBV实验研究  2、人脐带血来源树突状细胞抗HBV治疗实验研究[D];重庆医科大学;2004年
4 翟宝进;超声波逆转人肿瘤多药耐药的体内实验研究[D];重庆医科大学;2004年
5 王宁;精原干细胞途径建立hFIX转基因小鼠及Flt3配基乳腺生物反应器研究[D];复旦大学;2003年
6 郑斌;hhlim基因的表达调节及其与心肌细胞肥大发生之间的关系[D];河北医科大学;2003年
7 王昌源;多房棘球绦虫亚单位疫苗及DNA疫苗初步研究[D];重庆医科大学;2003年
8 雷撼;新型阳离子脂质体的合成及人β防御素2基因转染和表达的研究[D];第三军医大学;2003年
9 马晶波;红景天甙对黑素细胞生物学作用的研究及美白中草药筛选过程中一些问题的探讨[D];复旦大学;2003年
10 高蓝;RAPD法鉴定番茄杂种纯度及番茄WO和TM-2基因RAPD标记的研究[D];西北农林科技大学;2001年
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1 黄力;口蹄疫多表位DNA疫苗的免疫原性[D];河北医科大学;2004年
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3 刘忠渊;利用毕赤酵母系统表达功能蛋白的研究[D];新疆大学;2004年
4 刘炯;宫颈癌染色体3p14杂合性缺失和微卫星不稳定性研究[D];江西医学院;2003年
5 赖相红;利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研究[D];新疆农业大学;2002年
6 刘岭;蜂毒素提取纯化方法与质量标准研究[D];第二军医大学;2002年
7 王继英;逆转录病毒表达载体的构建及其鸡输卵管生物反应器的制作[D];山东农业大学;2003年
8 牛国栋;甜菜夜蛾核多角体病毒泛素基因的分子进化及功能研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
9 曹宏;抗对虾白斑综合症病毒单链抗体基因与葡萄糖氧化酶基因的融合及在酵母Pichia pastoris中表达[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2003年
10 黄梅;转人生长激素(hGH)基因F_4代红鲤中转植基因定位研究[D];陕西师范大学;2000年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏咸柱,韩慧民,李刚,朱明琛,李玉文,邹全明,殷震;犬、猫、貂细小病毒通用快速诊断盒的研制[J];病毒学报;1987年02期
2 许树林,沈秀丽;细小病毒在肉食动物中的感染流行[J];黑龙江畜牧兽医;1996年10期
3 吴石金,周建群;运用ELISA快速检测CPV抗体方法的建立与均衡性研究[J];微生物学杂志;2002年04期
4 乔军,孟庆龄,夏咸柱,何宏彬;用PCR法检测东北虎感染猫细小病毒的研究[J];畜牧与兽医;2001年05期
5 刘忠华,钟翎,黄韧,程树军;半嵌套式PCR技术区别检测犬细小病毒疫苗株和强毒株的研究[J];中国病毒学;2003年04期
6 李天宪,赵林,罗怡珊,冯锋;四种动物病毒的细胞培养及血凝检测的比较研究[J];中国病毒学;1994年01期
7 黄金华,刘长坤,罗春明,严为明,李成,谷守林,蔡虹,刘长明;用免疫金标记电镜技术检测病毒及其抗体[J];中国动物检疫;1998年04期
8 蔡家利,张振兴,蔡宝祥;云豹病毒性肠炎的研究——病毒鉴定[J];中国兽医科技;1988年04期
9 李六金,李成,姜焕宏,吴钟灵,胡淑贤,师长宏,张志培,李学忠,刘晓荣;猫鼻气管炎病毒、杯状病毒、泛白细胞减少症病毒的分离及其形态学观察[J];中国预防兽医学报;2001年05期
10 张洪英,刘立奎,姜建宏,崔尚金;猫细小病毒NS部分基因的克隆及序列分析[J];中国预防兽医学报;2004年06期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 姜世金;Ⅰ型马立克氏病病毒pp38和pp24基因的表达及序列测定与分析[D];中国农业大学;2003年
2 骆学农;猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSO18重组基因工程疫苗的研究[D];中国农业科学院;2005年
3 袁改玲;猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组基因工程疫苗的研制[D];中国农业科学院;2005年
4 高玉伟;虎源和狮源H5N1亚型流感病毒进化分析与HA基因重组犬2型腺病毒构建研究[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 宋素泉;J亚型禽白血病JL-2株病毒的分离鉴定及gp85基因的克隆与表达[D];东北农业大学;2004年
2 殷相平;狂犬病病毒G+N双基因重组腺病毒的构建[D];甘肃农业大学;2004年
3 杨剑秋;犬传染性肝炎间接ELISA诊断方法的建立及初步应用[D];吉林大学;2007年
【二级引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 杨松涛;猫泛白细胞减少症病毒VP2基因遗传进化及其重组蛋白免疫原性研究[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 杨若松;H5N1亚型禽流感病毒HA基因在马立克病毒上重组体的构建[D];河北农业大学;2006年
2 刘燕玲;犬传染性肝炎病毒IX基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2007年
3 胡潇;表达H5N1亚型禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的构建[D];河北农业大学;2008年
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 赵忠鹏;夏咸柱;扈荣良;张守峰;袁慧君;谢之景;闫芳;黄耕;杨松涛;;表达狂犬病毒糖蛋白抗原的重组犬2型腺病毒的构建及鉴定[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
2 谢之景;夏咸柱;扈荣良;闫芳;赵忠鹏;黄耕;;表达犬细小病毒VP2蛋白重组犬2型腺病毒的构建及鉴定[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
3 闫芳;夏咸柱;扈荣良;谢之景;赵忠鹏;黄耕;;表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒构建与鉴定[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
4 张守峰;扈荣良;肖跃强;田向阳;夏咸柱;;狂犬病病毒糖蛋白重组犬2型腺病毒的构建[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
5 李海涛;扈荣良;张守峰;肖跃强;袁慧君;涂长春;;狂犬病病毒核蛋白基因重组犬2型腺病毒构建研究[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
6 王永志;扈荣良;王莘;张守峰;李海涛;肖跃强;夏咸柱;;狂犬病病毒糖蛋白膜外区重组犬-2型腺病毒构建及免疫研究[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 邱薇;犬2型腺病毒基因重组活疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军需大学;2001年
2 高玉伟;虎源和狮源H5N1亚型流感病毒进化分析与HA基因重组犬2型腺病毒构建研究[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 王永志;重组犬2型腺病毒及其免疫研究[D];吉林农业大学;2005年
2 田向阳;含狂犬病病毒SRV9株G基因的重组犬2型腺病毒的构建[D];甘肃农业大学;2005年
3 崔艳;犬2型腺病毒六邻体蛋白结构分析、改造及其基因转移载体的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
4 张洋;犬2型腺病毒分离、鉴定、特性分析及鼬獾血清腺病毒抗体调查[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
5 何春燕;表达虎源H5N1亚型禽流感病毒NP蛋白重组犬2型腺病毒的构建与鉴定[D];四川农业大学;2009年
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