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《中国食品卫生杂志》 2010年06期
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氯霉素驱动的β-半乳糖苷酶互补体系的构建

李黄金  陈伟  赵林  邱映丽  赖琼英  林冬霞  郭志云  
【摘要】:目的构建氯霉素驱动的β-半乳糖苷酶(β-gal)互补体系,以期建立氯霉素残留检测用非竞争性均相酶互补免疫分析系统(OS-ECIA)。方法从大肠杆菌DH5α和BL21株分别克隆β-galΔα和Δω基因,采用重叠延伸PCR组装含抗氯霉素抗体可变区的互补肽融合蛋白,在T7启动子驱动下于大肠杆菌宿主株中表达,表达产物纯化与复性后进行酶互补活性分析。结果成功克隆和高效表达融合肽基因VH-CAP-Δα和VL-CAP-Δω,表达产物为包涵体蛋白,经纯化和复性后呈现特征性酶学互补活性,且酶活性呈现氯霉素依赖性增加。结论成功构建氯霉素驱动的β-gal互补体系。

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