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《中国农业科学》 2015年04期
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模拟胃液对Pen a 1及其抗原表位免疫原性的影响

赵鑫  高美须  牟慧  沈月  王志东  
【摘要】:【目的】Pen a 1是虾中的主要过敏原,已知其5个抗原表位在过敏反应中起着决定性的作用。用全蛋白抗体和表位特异性抗体,检测Pen a 1经体外模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)消化后其抗原表位免疫原性的变化情况,为研究人体消化对Pen a 1的影响机理及脱敏食品的制备提供理论依据。【方法】以刀额新对虾(metapenaeus ensis)为原材料,提取纯化虾过敏原Pen a 1,采用Fmoc化学法合成Pen a 1抗原表位的5个多肽片段(No.1—No.5),分别与载体蛋白KLH和牛血清蛋白BSA偶联制备人工免疫原和包被原。用Pen a 1和制备的多肽免疫原免疫新西兰纯种白兔获得全白蛋抗体和特异性表位抗体。参照美国药典模拟人体胃液的条件消化处理Pen a 1,利用SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE观察消化后Pen a 1分子量变化;通过免疫印迹(Western-blot)定性观察Pen a 1消化后生成的新蛋白片段与各抗体的结合情况;再经竞争抑制酶联免疫吸附试验(ci-ELISA)定量检测消化后的Pen a 1和表位多肽与各抗体结合能力,从而得出Pen a 1经SGF消化后各抗原表位免疫原性的变化程度。【结果】SDS-PAGE结果显示Pen a 1随SGF消化时间的延长逐渐被降解,在22 kD处生成一些较稳定的新蛋白片段,Tricine-SDS-PAGE结果表明在1.7—18 k D之间无新蛋白片段生成。Western-blot表明消化后分解生成的小分子蛋白与六种抗体发生不同程度结合,其中全蛋白抗体和No.4抗体几乎与生成的所有小分子蛋白结合,在22 k D左右处生成的稳定新蛋白片段均与No.3、4、5抗体有较强的结合,而与No.1、2抗体结合较弱甚至无结合,表明该蛋白携带No.3、4、5表位,而基本无No.1、2表位。ci-ELISA结果显示,Pen a 1经SGF消化后对全蛋白抗体和5个表位抗体的抑制率均显著下降,说明经过消化后Pena1及其抗原表位的免疫原性均明显降低,各抗原表位消化稳定性排序为No.4No.2No.1No.3No.5,其中No.2、1、3之间无显著性差异;ci-ELISA检测表位多肽经消化后其免疫原性也显著下降,消化稳定性排序为No.1No.2No.3No.4No.5,其中No.2、3、4之间无显著性差异。结合免疫印迹结果可知No.4抗原表位消化稳定性最高,但其表位多肽消化稳定性没有显著高于其它所有表位多肽,说明在消化过程中Pen a 1结构对该表位起到一定的保护作用,使其保持较高的消化稳定性;No.1、2、3次之,3个表位间无显著性差异;No.5消化稳定性最差,表明Pen a 1空间结构对其无明显保护作用。【结论】建立了一种用表位抗体检测过敏原经模拟消化后抗原表位消化稳定性的方法。Pen a 1经SGF消化后,免疫原性降低,分解生成部分较稳定的蛋白片段,但仍具有致敏性;5个抗原表位中No.4消化稳定最高,No.5最差。

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 刘光明;钟永嘉;曹敏杰;蔡秋凤;张凌晶;苏文金;;鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化[J];集美大学学报(自然科学版);2010年04期
2 廖黔宁,罗静初,周培爱,顾孝诚,梁宋平;虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ-(HWTX-Ⅰ)28肽类似物的化学合成与活性鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年05期
3 胡志和;;虾类过敏原及消减方法研究进展[J];食品科学;2013年01期
4 谢秀玲;李欣;高金燕;陈红兵;;非热加工对食物过敏原影响的研究进展[J];食品科学;2013年17期
5 赵杰;高美须;潘家荣;兰丽平;睢珂;牟慧;许舒婷;;利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究[J];分析测试学报;2013年10期
6 黄园园;刘光明;周利亘;张凌晶;苏文金;曹敏杰;;蟹类主要过敏原的模拟肠胃液消化及其对过敏原活性的影响[J];中国食品学报;2009年04期
7 赵杰;高美须;潘家荣;王志东;兰丽平;睢珂;许舒婷;刘超超;牟慧;;Pen a 1表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定[J];中国农业科学;2013年15期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏波;夏立新;陈红兵;邬玉兰;刘志刚;;小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化[J];江西师范大学学报(自然科学版);2010年06期
2 易海涛;夏立新;刘芳;闫浩;黄钟;汤慕瑾;陈大玮;刘志刚;;克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定[J];江西师范大学学报(自然科学版);2011年03期
3 周向红;阎斌伦;李士虎;;中国明对虾主要过敏原基因分子克隆与序列分析[J];水产科学;2011年02期
4 Haider Samee;Jamil Khalid;;Studies on the Specific Degranulation of Mast Cell Sensitized by Several Allergens in vitro[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年02期
5 陈同强;郭丹;李腾杉;李佳;廖剑霖;李立明;;中国龙虾过敏原的分离纯化研究[J];赣南医学院学报;2012年03期
6 李荔;陈樱麟;闫浩;刘志刚;;斑马鱼原肌球蛋白基因克隆表达及免疫学鉴定[J];水产科学;2013年01期
7 陈同强;郭丹;李腾杉;李佳;廖剑霖;李立明;;用柱层析法检测中国龙虾主要变应原的研究[J];广东农业科学;2013年08期
8 牟慧;高美须;李淑荣;王志东;潘家荣;赵杰;支玉香;李树锦;赵鑫;;虾过敏原Pen a1抗原表位的关键氨基酸分析[J];分析化学;2014年11期
9 崔静;李太武;苏秀榕;李晔;徐静;周君;应琪;王中华;李松伟;;南移养殖的刺参(Apostichopus japonicus)cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的研究[J];海洋与湖沼;2010年06期
10 刘光明;黄园园;蔡秋凤;翁凌;苏文金;曹敏杰;;水产品主要过敏原的模拟胃液消化实验的条件优化[J];海洋与湖沼;2011年06期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 董秀萍;海参、扇贝和牡蛎的加工特性及其抗氧化活性肽的研究[D];江苏大学;2010年
2 杨剑婷;白果过敏蛋白及其致敏机理的研究[D];南京林业大学;2010年
3 梁蓉;以OSA变性淀粉为乳化剂的纳米乳液制备及特性研究[D];江南大学;2013年
4 周催;利用动物模型研究食物潜在致敏性及其致敏机理[D];中国农业大学;2014年
5 徐响;蜂王幼虫中水溶性蛋白质分离鉴定及生物活性研究[D];中国农业大学;2014年
6 马英桃;桃过敏原蛋白nsLTP的基因多样性和双单抗夹心ELISA测定方法[D];浙江大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高再兴;抗菌肽的化学合成及活性研究[D];西北大学;2003年
2 聂东宋;虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX-Ⅰ)在巴氏比赤酵母中的表达[D];湖南师范大学;2002年
3 黄永东;胸腺素α_1和抗SARS八肽的化学合成与分离纯化[D];天津大学;2004年
4 顾可飞;辐照对虾过敏原生化性质及抗原性的影响[D];中国农业科学院;2007年
5 张华;刀额新对虾主要致敏原的分离纯化与鉴定[D];江南大学;2008年
6 沈丽燕;食品过敏原压电型免疫传感快速检测技术的研究[D];江南大学;2008年
7 孙元军;固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究[D];山东科技大学;2008年
8 梁银龙;蟹类过敏原的研究[D];集美大学;2008年
9 肖有明;鲤鱼小清蛋白的抗原性研究[D];南昌大学;2008年
10 李兵;蟹类过敏原的BALB/c小鼠模型研究[D];集美大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 易海涛;夏立新;刘芳;闫浩;黄钟;汤慕瑾;陈大玮;刘志刚;;克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定[J];江西师范大学学报(自然科学版);2011年03期
2 赵绮华,赖荷,陈丽金,王锡忠,邹泽红;梭子蟹过敏原致敏组分的分析研究[J];广西医学;2005年07期
3 宋国胜;胡松青;李琳;;超声波技术在食品科学中的应用与研究[J];现代食品科技;2008年06期
4 睢珂;潘家荣;王磊;王志伟;赵杰;郑月明;诸葛洁婧;潘文斌;;醚型菊酯类农药通用抗原的合成及鉴定[J];分析化学;2012年08期
5 顾可飞;高美须;李春红;李淑荣;潘家荣;;辐照对虾过敏原生化性质的影响[J];核农学报;2007年02期
6 董晓颖;高美须;潘家荣;张春红;王志东;李淑荣;;不同处理方法对虾过敏蛋白分子量及抗原性的影响[J];核农学报;2010年03期
7 杜欣军;张伟伟;孙伟英;王硕;;凡纳滨对虾原肌球蛋白基因表达模式与重组表达[J];渔业科学进展;2009年04期
8 王章存;徐贤;;超高压处理对蛋白质结构及功能性质影响[J];粮食与油脂;2007年11期
9 李燕春,吴彩霞,张豁达;深圳地区荨麻疹、湿疹变应原检测及脱敏治疗[J];中国麻风皮肤病杂志;2005年09期
10 马汉军;路建锋;潘润淑;;高压对食品中蛋白质的影响[J];农产品加工(学刊);2005年12期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 李振兴;虾(Penaeus Vannamei)过敏原免疫活性的研究[D];中国海洋大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 乌云娜;超高压处理对牛骨骼肌原肌球蛋白结构的影响[D];内蒙古农业大学;2011年
2 郑礼娜;虾类过敏原的活性分析及其抗原表位的研究[D];中国海洋大学;2011年
3 张联英;几种主要淡水鱼胶原蛋白的制备及其特性研究[D];中国海洋大学;2004年
4 王晓斐;中国对虾(Penaeus chinensis)主要过敏原的鉴定及性质研究[D];中国海洋大学;2008年
5 张轶群;海产品过敏原免疫芯片检测方法的研究[D];中国海洋大学;2009年
6 黄园园;水产过敏原的模拟胃肠液消化[D];集美大学;2009年
7 黄建芳;河虾主要过敏原单克隆抗体的制备及河虾过敏原不同组分共同表位分析[D];暨南大学;2010年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 潘云华;周东霞;李嘉琦;陈元鼎;;乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究[J];实用医技杂志;2007年05期
2 张奉春,JohnB.Harley,R.HalScofield,董怡;60 kD人SSA抗原表位免疫反应的特异性[J];中华风湿病学杂志;1998年01期
3 叶璐夷;谢莉;贺云蕾;朱自严;;3例弱D表型献血者的RhD抗原表位和分子机制研究[J];临床输血与检验;2013年02期
4 焦新安,王志亮,杨静,文其乙,蔡学忠,曹军平,张如宽,刘秀梵;单克隆抗体测定沙门氏菌鞭毛蛋白属共同抗原表位的分布特性[J];细胞与分子免疫学杂志;1995年Z1期
5 吴筱莹;何颖军;徐红先;邵超鹏;;RHD1227A型弱D的D抗原表位分析[J];中国现代医学杂志;2011年24期
6 叶璐夷;谢莉;郭忠慧;朱自严;;中国人中发现2种新的弱D型[J];中国输血杂志;2013年06期
7 吴筱莹;庄乃保;徐红先;何颖军;邵超鹏;;1例新的弱D型的鉴定[J];临床输血与检验;2012年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 曾昭伟;基于抗原表位分析的妊娠相关血浆蛋白A的克隆表达及其临床诊断应用研究[D];天津医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李雪美;抗vWF单克隆抗体SZ125的抗原表位的精确氨基酸定位研究[D];苏州大学;2013年
2 王斌;流行性乙型脑炎病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及病毒特异性抗原表位鉴定[D];中国农业科学院;2009年
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