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《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2015年04期
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户尘螨Ⅱ类变应原Der p2 T细胞表位融合基因的克隆和原核表达

段彬彬  宋红玉  李朝品  
【摘要】:目的原核表达、纯化户尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)主要变应原Der p2的T细胞表位融合肽。方法将已报道的户尘螨Der p2中编码4个T细胞表位(T1~T4)的核苷酸序列以T1-T2-T3-T4的方式连接,人工合成为嵌合基因,命名为Der p2 T。PCR扩增目的基因Der p2 T,将纯化的扩增片段克隆至p ET-28a(+)载体,构建原核重组表达质粒p ET-28a(+)-Der p2 T,并进行双酶切验证。大量诱导表达含p ET-28a(+)-Der p2T的E.coli BL-21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经Ni-NTA亲和层析获得纯化重组蛋白,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析。ELISA法检测重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清Ig E抗体的结合能力。结果双酶切结果表明,构建了原核重组表达质粒p ET-28a(+)-Der p2 T。SDS-PAGE分析结果显示,获得相对分子质量(Mr)为10 000的重组Der p2 T细胞表位融合肽。Western blotting分析结果显示,纯化了Der p2的T细胞表位融合肽。Der p2 T细胞表位融合肽对粉尘螨哮喘患者的血清Ig E结合能力[(37.70±9.89)μg/ml]较Der p2显著降低[(85.89±9.63)μg/ml](P0.01)。结论制备Der p2 T细胞表位融合肽。与Der p2相比,重组Der p2 T细胞表位融合肽对户尘螨过敏患者血清Ig E抗体的结合能力明显降低。
【作者单位】皖南医学院医学寄生虫学教研室;
【基金】:国家自然科学基金(No.81270091,30872367)~~
【分类号】:R384.4

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