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《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 2010年02期
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蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建

曹利静  冯宪敏  魏超君  王凤云  张西臣  卢思奇  
【摘要】:目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 冯宪敏;曹利静;王凤云;张西臣;卢思奇;;特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年04期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 曹利静;冯宪敏;卢思奇;张西臣;王凤云;;蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年01期
2 喻建军,张西臣,何宏轩,李建华,尹继刚,杨举,田宗成;犬贾第虫dsRNA病毒的鉴定及特性[J];中国兽医学报;2001年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔力凡;吴国华;张强;;核酶在疾病基因治疗中的应用研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年04期
2 曹利静;冯宪敏;卢思奇;张西臣;王凤云;;蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年01期
3 李建华;张西臣;尹继刚;杨举;;微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因在大肠杆菌中的表达[J];莱阳农学院学报;2005年03期
4 陈丽凤;李建华;张西臣;刘全;赵月萍;曹利利;陈超;;犬贾第虫病毒(长春株)全基因组序列分析[J];畜牧兽医学报;2006年04期
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8 曹利利;李建华;张西臣;张国才;宫鹏涛;杨举;;犬贾第虫病毒感染性体外转录体制备及转染试验[J];中国病原生物学杂志;2008年01期
9 陈丽凤;李建华;张西臣;刘全;赵月平;曹利利;;犬贾第虫携病毒株体外纯培养的建立[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2006年04期
10 冯宪敏;曹利静;王凤云;张西臣;卢思奇;;特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年04期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
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2 陈丽凤;犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因表达抑制效果研究[D];吉林大学;2006年
3 刘成武;病毒载体介导的微型核酶对犬贾第虫端粒酶活性的影响[D];吉林大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 韩乾忠;柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定及细胞内分布[D];吉林大学;2011年
2 崔力凡;抗FMDV核酶的筛选及其重组成纤维细胞株的建立[D];中国农业科学院;2011年
3 赵月平;阴道毛滴虫病毒的鉴定及衣壳蛋白基因的原核表达[D];吉林大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 曹利静;冯宪敏;卢思奇;张西臣;王凤云;;蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年01期
2 祝虹;卢思奇;郭增柱;王正仪;;蓝氏贾第鞭毛虫四川株纯培养的建立[J];中国寄生虫病防治杂志;1992年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 邓文生,杨希才,彭毅,康良仪;锤头型核酶作用机理的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;1999年05期
2 喻建军,张西臣,何宏轩,李建华,尹继刚,杨举,田宗成;犬贾第虫dsRNA病毒的鉴定及特性[J];中国兽医学报;2001年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 冯宪敏;曹利静;王凤云;张西臣;卢思奇;;特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年04期
2 曹利静;冯宪敏;卢思奇;张西臣;王凤云;;蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年01期
3 石裕明,王敏;南宁市郊区两小学蓝氏贾第鞭毛虫感染情况的调查[J];广西医学;1989年06期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前8条
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3 本报记者 王华;饮用水执行新国标筑市民喝水更放心[N];贵阳日报;2007年
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8 记者 徐行翔 通讯员 杜小平;自来水将达直饮水标准[N];嘉兴日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈丽凤;犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因表达抑制效果研究[D];吉林大学;2006年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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3 蒋鸿飞;多色荧光稀土纳米颗粒的制备与应用[D];大连理工大学;2009年
4 商素亮;重组腺病毒介导的VEGF核酶对肺腺癌A549细胞生长及VEGF表达的影响[D];苏州大学;2009年
5 严玲玲;抗人VEGF发卡状核酶治疗肝癌的实验研究[D];苏州大学;2006年
6 曹利利;犬贾第虫病毒感染性体外转录体的制备及转染试验[D];吉林大学;2007年
7 李薇;青蒿琥酯对白纹伊蚊四龄幼虫的毒性研究[D];暨南大学;2008年
8 李伍新;FCV拯救系统的建立及GFP的表达[D];吉林大学;2008年
9 刘德忠;抗HPV-6b/11 E1通用核酶—Rz1198和Rz1282的体外制备、活性鉴定及鸟枪型核酶pRE1的构建[D];第一军医大学;2000年
10 袁国刚;靶向细菌16S rRNA核酸抗菌素的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
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