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《中华烧伤杂志》 2003年01期
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人胎儿表皮干细胞的体外分离培养及基因转染

丁国斌  陈璧  韩军涛  汤朝武  王波涛  
【摘要】:目的 探讨人胎儿表皮干细胞体外分离培养的方法以及作为体外基因转染靶细胞的可行性。 方法 利用Ⅳ型胶原快速贴附法分离人胎儿表皮干细胞 ,以人胎儿成纤维细胞条件培养液配制表皮干细胞培养基 ,通过角蛋白 19(K19)和整合素 β1免疫组化染色、细胞周期分析及克隆形成率测定 ,对培养细胞进行鉴定。采用脂质体介导法 ,以含血管内皮细胞生长因子 16 5 (VEFG16 5 )基因片段的真核表达载体 pcDNA3 .1( pcDNA3.1/VEGF16 5 )转染培养细胞 ;采用病毒载体介导法 ,以含报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)的重组腺相关病毒载体 (raav/GFP)转染培养细胞。应用免疫组化染色及荧光显微镜观察检测转染效果。 结果 人胎儿表皮干细胞呈明显克隆性生长 ,克隆形成率高 ,G1期细胞比例明显高于普通基底层角质细胞 ,K19和整合素 β1免疫组化染色呈强阳性。pcDNA3 .1/VEGF16 5转染的表皮干细胞VEGF16 5免疫组化染色阳性 ,raav/GFP转染的表皮干细胞呈现强荧光。 结论 利用Ⅳ型胶原快速贴附法及人胎儿成纤维细胞条件培养基 ,可初步实现人胎儿表皮干细胞的分离培养。以脂质体为介导或以腺相关病毒为载体进行人胎儿表皮干细胞的体外基因转染是可行的。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 周鹏翔,罗成群,谷永红,贺全勇,李高峰,彭长缨,彭浩;角蛋白19在Ⅲ度烧伤创面修复过程中的表达及意义[J];中国医师杂志;2003年09期
2 付小兵,李建福,盛志勇;表皮干细胞:实现创面由解剖修复到功能修复飞跃的新策略[J];中华烧伤杂志;2003年01期
3 李剑,戴育成;无血清培养条件下人表皮干细胞的生物学特性研究[J];中华烧伤杂志;2005年04期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 赵慧英;神经干细胞和皮肤干细胞的体外培养及诱导分化神经细胞的研究[D];西北农林科技大学;2004年
2 周建大;原代成体皮肤角质形成细胞、成纤维细胞的培养和转基因研究[D];中南大学;2004年
3 田伟;大鼠ESC复合猪小肠粘膜下层体外构建组织工程皮肤的实验研究[D];中国医科大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李黎波,冯茹,周淑芸;重组变异体二氢叶酸还原酶和绿色荧光蛋白腺相关病毒载体的构建及外源基因表达[J];中国实验血液学杂志;2002年03期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 赵慧英;神经干细胞和皮肤干细胞的体外培养及诱导分化神经细胞的研究[D];西北农林科技大学;2004年
2 李克强;重组逆转录病毒载体介导人ANGPTL4基因转染的抗肿瘤作用[D];浙江大学;2005年
3 张海增;重组腺病毒Ad-AscyclinD1、Ad-Asmyc、Ad-RA538在肿瘤基因治疗中的有效性和安全性研究[D];中国协和医科大学;1999年
4 张庆玲;LMP1转基因小鼠构建及功能初步研究[D];第一军医大学;2006年
5 常青;反义缺氧诱导因子-1α治疗胰腺癌及其作用机制的实验研究[D];华中科技大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 胡舜英;腺相关病毒载体介导外源基因入人外周血干/祖细胞的实验研究[D];第一军医大学;2000年
2 李黎波;腺相关病毒载体介导变异体DHFR和GFP融合基因入人外周血干/祖细胞的实验研究[D];第一军医大学;2001年
3 李云;白介素2重组腺病毒转染膀胱移行上皮预防大鼠膀胱癌的实验研究[D];第二军医大学;2004年
4 刘雄;腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1基因表达对鼻咽癌转移影响的实验研究[D];第一军医大学;2006年
【同被引文献】
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2 李校坤,姚成灿,许华,郑青 ,黄亚东,刘树铮;紫外辐射对皮肤角化细胞的影响及其防护的研究[J];日用化学工业;2002年02期
3 周鹏翔,罗成群,谷永红,贺全勇,李高峰,彭长缨,彭浩;角蛋白19在Ⅲ度烧伤创面修复过程中的表达及意义[J];中国医师杂志;2003年09期
4 杨玲,刘善荣,仵敏娟,刘军,刘冰,邢新,刘厚奇;成人体皮表皮干细胞的定位及分离培养[J];第二军医大学学报;2004年08期
5 牛云飞,路卫,夏照帆,张步涛,韦多,田建广,程大胜;表皮干细胞在人体不同部位皮肤的分布差异[J];第二军医大学学报;2004年09期
6 周党卫,韩发,滕中华,朱文琰,师生波;UV-B辐射增强对植物光合作用的影响及植物的相关适应性研究[J];西北植物学报;2002年04期
7 伍津津,刘荣卿,叶庆佾,唐书谦,钟白玉;人各段毛囊上皮细胞培养的增殖力比较[J];第三军医大学学报;1999年11期
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10 张仁礼,李海标;胚胎干细胞向表皮样干细胞分化体外条件的研究[J];解剖学研究;2001年03期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 邱泽亮;曾元临;辛国华;楼天正;罗旭;;人表皮干细胞体外分离和培养的研究[J];江西医药;2006年02期
4 唐建兵,陈君,杨光成,李勤,刘宏伟,廖元兴;角蛋白在头皮中的分布及其在干细胞研究中的意义[J];中国美容医学;2005年04期
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6 李凡,陈开翠,李佩芝;MEBT/MEBO治疗耐药金葡菌感染残余创面87例临床分析[J];中国烧伤创疡杂志;2005年01期
7 刘亦峰;黄金华;周荣芳;刘森;徐刚;周杰;;严重烧伤残余创面MRSA感染的整体化治疗[J];中国烧伤创疡杂志;2007年03期
8 付小兵;进一步重视体表慢性难愈合创面发生机制与防治研究[J];中华创伤杂志;2004年08期
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10 贾赤宇;重视创面愈合研究提高烧伤救治水平[J];中华烧伤杂志;2003年06期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 丁国斌;人胎儿表皮干细胞的分离培养、基因转染及向毛囊的定向分化[D];第四军医大学;2004年
2 陶克;人胎儿皮脂腺细胞和汗腺细胞的体外分离培养和人胎儿表皮干细胞向毛囊、皮脂腺和汗腺诱导分化的初步研究[D];第四军医大学;2005年
3 周建大;原代成体皮肤角质形成细胞、成纤维细胞的培养和转基因研究[D];中南大学;2004年
4 张宗学;愈创营养油促进大鼠皮肤缺损创面愈合的实验研究[D];辽宁中医药大学;2007年
5 郭永峰;人表皮细胞去分化的实验研究[D];中国医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 邱泽亮;人表皮干细胞的分离和培养的研究[D];江西医学院;2005年
2 陶克奇;大鼠自体全层皮肤移植成活过程中表皮干细胞变化规律研究[D];南华大学;2006年
3 谢晓繁;成体表皮干细胞分离培养、鉴定及表皮细胞向干细胞方向逆分化的初步研究[D];第四军医大学;2006年
4 刘大勇;山羊皮肤干细胞及绿色荧光蛋白基因转染研究[D];西北农林科技大学;2006年
5 陈刚泉;应用表皮干细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤及其移植实验研究[D];南昌大学;2006年
6 王俊;玉米幼芽提取物凝胶的制备及其抗皮肤损伤作用的研究[D];西北农林科技大学;2007年
7 王慧君;毛囊培养上清液诱导骨髓间充质干细胞分化的初步研究[D];中国医科大学;2008年
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9 方璇;何金生;唐亚宁;付远辉;王小波;郑妍鹏;;免疫磁珠纯化人呼吸道合胞病毒F蛋白方法的建立[J];安徽医科大学学报;2011年08期
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2 陶克;陈璧;丁国斌;谢松涛;王洪涛;胡大海;;联合应用3-甲基-1-异丁基黄嘌呤、胰岛素、地塞米松对人胎儿表皮干细胞的诱导分化作用[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
3 谢晓繁;刘虎仙;付小兵;贾赤宇;;表皮干细胞分离和鉴定的研究进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
4 李孝建;沈雁;张志;李延仓;杨小红;曾耀英;;不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
5 雷永红;付小兵;盛志勇;刘波;周学萍;;TNF诱导人表皮干细胞通过p38 MAPK依赖机制产生VEGF、HGF和IGF-1的研究[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
6 李孝建;沈雁;张志;曾耀英;李延仓;杨小红;;不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
7 程树军;黄锦桃;李海标;;ES源性表皮干细胞在腹腔微环境中分化潜能的初步研究[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
8 刘洋;付小兵;李建福;;表皮干细胞及其与创面修复研究进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 刘德伍;黄培信;毛远桂;陈剑平;蓝蔚;王联群;;不同发育阶段人表皮干细胞端粒酶表达的比较研究[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
10 黄飞;林源;王润秀;陆树良;梁自乾;冯振江;周艳;李铨;;基质糖基化对表皮干细胞增殖与凋亡的影响[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
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1 本报通讯员 张献怀 本报记者 仇方迎;“返老还童”有望梦想成真[N];科技日报;2001年
2 支勇平 记者 张哲浩;我首次建成人类胎儿胰腺干细胞系[N];科技日报;2004年
3 刘霞;科学家在毛囊中发现“皮肤干细胞之母”[N];科技日报;2010年
4 ;我国学者率先发现人体表皮细胞存在逆分化现象[N];中国高新技术产业导报;2002年
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1 尹德龙;表皮干细胞在不同外界因素下对其生物学特性的影响及机制研究[D];华中科技大学;2012年
2 王联群;hTERT基因在人表皮干细胞中的表达与调控研究[D];南昌大学;2010年
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4 李娟;Kruppel样因子4(KLF4)在小鼠表皮干细胞中的表达和功能研究[D];华中科技大学;2011年
5 李美蓉;表皮干细胞多向分化潜能特征的发现及其相关研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 丁国斌;人胎儿表皮干细胞的分离培养、基因转染及向毛囊的定向分化[D];第四军医大学;2004年
7 杨学义;表皮干细胞建系及重建角膜缘干细胞缺损眼表研究[D];西北农林科技大学;2004年
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1 陈萌;免疫荧光双标法应用于小鼠表皮干细胞分子标记的筛选[D];山东大学;2011年
2 李云剑;培养基血清浓度对人表皮干细胞增殖分化的影响[D];南京医科大学;2010年
3 方碧清;碱性成纤维细胞因子对皮肤干细胞神经分化影响的研究[D];福建医科大学;2011年
4 牛云飞;表皮干细胞的体表分布及其分离、培养和鉴定[D];第二军医大学;2004年
5 董蕊;人表皮干细胞的体外培养及在组织工程皮肤构建中的应用研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
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9 李新平;腺病毒介导hPDGF-BB转染表皮干细胞对其体外细胞增殖的实验研究[D];暨南大学;2010年
10 魏潇;表皮干细胞对角质形成细胞增殖的影响[D];广西医科大学;2008年
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