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《中华骨科杂志》 2003年03期
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Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测

盛璞义  廖威明  李晓艳  李佛保  何智勇  黄纲  谭美珍  
【摘要】:目的探讨利用Tet-on基因表达系统调控目的基因在骨髓基质干细胞中表达的可能性和量效关系,为利用该系统调控BMP基因在骨髓基质干细胞中的表达奠定基础。方法以荧光素酶(luciferase)基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬间转染方法,将pTet-on调节质粒和pTRE-luciferase反应质粒共转染骨髓基质干细胞,加入系列浓度的强力霉素(doxycyline)后,观察doxy-cyline的诱导效应。结果(1)pTet-on表达系统质粒DNA经HindⅢ单酶切、琼脂糖凝胶电泳后,可见6.02kb和1.38kb两个片段;pTRE-luciferase质粒经HindⅢ单酶切线性化,可见5.2kb的片段,均符合质粒图谱。(2)随着doxycyline浓度的增加,荧光素酶的活性也逐渐增加。未转染的骨髓基质干细胞虽经doxycyline诱导,但其RLU值与空白对照(蒸馏水)非常接近,说明未转染的骨髓基质干细胞不受doxy-cyline诱导。而转染的骨髓基质干细胞在未加入诱导剂时,其RLU(relative-luciferase-unit)值也接近空白对照值。结论转染Tet-on基因表达控制系统的骨髓基质干细胞对doxycyline诱导具有较好的反应性,目的基因荧光素酶基因的表达效力对doxycyline具有严格的计量依赖关系。因此,利用Tet-on基因调控系统对目标基因在骨髓基质干细胞中的表达进行调控是可行的。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前8条
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中国硕士学位论文全文数据库 前8条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前7条
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【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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3 汤祥华;全仁夫;;医用纳米生物材料基因相容性的研究进展[J];中医正骨;2008年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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3 刘延青!100083,娄思权!100083;骨髓基质中的骨源性干细胞[J];中华骨科杂志;2000年02期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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10 李蓝;;皮肤恶性肿瘤中潜在的肿瘤干细胞[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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3 本报记者 聂翠蓉;抓住致癌的真正元凶[N];科技日报;2006年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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