Tet-on基因表达系统转染骨髓基质干细胞和诱导调控效应检测
【摘要】：目的探讨利用Tet-on基因表达系统调控目的基因在骨髓基质干细胞中表达的可能性和量效关系,为利用该系统调控BMP基因在骨髓基质干细胞中的表达奠定基础。方法以荧光素酶(luciferase)基因为目的基因,应用Lipofectamine介导的瞬间转染方法,将pTet-on调节质粒和pTRE-luciferase反应质粒共转染骨髓基质干细胞,加入系列浓度的强力霉素(doxycyline)后,观察doxy-cyline的诱导效应。结果(1)pTet-on表达系统质粒DNA经HindⅢ单酶切、琼脂糖凝胶电泳后,可见6.02kb和1.38kb两个片段;pTRE-luciferase质粒经HindⅢ单酶切线性化,可见5.2kb的片段,均符合质粒图谱。(2)随着doxycyline浓度的增加,荧光素酶的活性也逐渐增加。未转染的骨髓基质干细胞虽经doxycyline诱导,但其RLU值与空白对照(蒸馏水)非常接近,说明未转染的骨髓基质干细胞不受doxy-cyline诱导。而转染的骨髓基质干细胞在未加入诱导剂时,其RLU(relative-luciferase-unit)值也接近空白对照值。结论转染Tet-on基因表达控制系统的骨髓基质干细胞对doxycyline诱导具有较好的反应性,目的基因荧光素酶基因的表达效力对doxycyline具有严格的计量依赖关系。因此,利用Tet-on基因调控系统对目标基因在骨髓基质干细胞中的表达进行调控是可行的。
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| 1 |
郭惠兰,谢华,谢东北,刘锡仪,黄绍轩;兔骨髓间充质干细胞分化成骨及VEGF表达[J];解剖学研究;2003年04期 |
| 2 |
王彦,丛笑倩,刘德莉,张文杰,崔磊,刘伟,曹谊林;Tet-on基因表达系统转染胚胎干细胞和调控效应检测[J];中国科学C辑:生命科学;2005年03期 |
| 3 |
郭惠兰,谢华,刘锡仪,黄绍轩;扩增对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响[J];中国口腔种植学杂志;2003年03期 |
| 4 |
赵孔波;周东生;;早期贴壁分离并机械刮除纯化法建立兔骨髓间充质干细胞体外培养体系[J];华北煤炭医学院学报;2005年06期 |
| 5 |
曹晓敏;林仲秋;庞战军;全松;邢福祺;;四环素及其衍生物诱导表达的pTet-On肺癌细胞系A549的建立[J];数理医药学杂志;2009年02期 |
| 6 |
张路;赵文志;何盛为;方旭;米立东;孙雪刚;杜广宇;孙传秀;;振动应力刺激骨髓间充质干细胞修复兔骨缺损[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年40期 |
| 7 |
杜广宇;赵文志;何盛为;米立东;张路;孙传秀;孙雪刚;;低频振动刺激骨髓基质干细胞修复骨缺损核因子受体激活剂/核因子受体激活剂配体/骨保护素通路变化的体内实验[J];中国组织工程研究;2012年10期 |
| 8 |
解继胜,黄赞松,唐毓金,黄海玲,陆敏安,赵琼芝;骨髓间充质干细胞诱导为成骨细胞的初步研究[J];右江民族医学院学报;2004年05期 |
| 9 |
李红霞,李国江,张俊杰;四环素类抗生素对基因表达的影响及其应用[J];药学进展;2004年09期 |
| 10 |
张梅英;李华;董婉维;杨葳;秦英;汪瑛;周生来;于洋;王惟;王太一;王禄增;;稳定整合pTet-on载体小鼠胚胎干细胞株的建立[J];中国实验动物学报;2006年03期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
伍志坚,吴小兵,曹晖,董小岩,王宏,侯云德;一种高效的重组腺伴随病毒载体生产系统[J];中国科学(C辑:生命科学);2001年05期 |
| 2 |
张晶,王泓威,吴宁华,沈珝琲;Jurkat Tet-on细胞系的建立[J];科学通报;1999年23期 |
| 3 |
吴小兵,董小岩,伍志坚,屈建国,侯云德;一种快速高效分离和纯化重组腺病毒伴随病毒载体的方法[J];科学通报;2000年19期 |
| 4 |
杜忠伟,丛笑倩,姚錱;维持Oct-4基因表达对小鼠胚胎干细胞分化的影响[J];科学通报;2001年09期 |
| 5 |
金丹,裴国献,王珂,魏宽海,陈滨,覃昱任,高宏;hBMP-7基因转染修复骨缺损的实验研究[J];中华骨科杂志;2003年12期 |
| 6 |
徐小良,戴尅戎,汤亭亭,严孟宁,朱振安,郁朝锋,徐旻,楼觉人;腺病毒介导的人骨形成蛋白2基因治疗的免疫学研究[J];中国修复重建外科杂志;2005年08期 |
| 7 |
魏义勇;胡蕴玉;郝伟;吕荣;王军;白建萍;;重组人骨形成蛋白2诱导脂肪成体干细胞向软骨分化的形态学研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年08期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
吴一民,陈建庭,孙炜;兔骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性[J];内蒙古医学院学报;2005年01期 |
| 2 |
许卫红,林建华,吴朝阳,王长升;自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨骨缺损的可行性(英文)[J];中国临床康复;2005年14期 |
| 3 |
刘延青!100083,娄思权!100083;骨髓基质中的骨源性干细胞[J];中华骨科杂志;2000年02期 |
| 4 |
高冬;陈文元;吴立娅;宋军;;衰老引发骨髓干细胞演变的规律及中药的干预作用[J];中医杂志;2009年01期 |
| 5 |
李慧丽,王彬尧;骨髓基质干细胞移植治疗心肌损伤[J];高血压杂志;2003年04期 |
| 6 |
陆东风,陈平安;骨髓基质干细胞定向分化成心肌样细胞的基础研究[J];血栓与止血学;2004年03期 |
| 7 |
周和平,蔡振杰,俞世强,赵科研,吴铁军;真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达[J];第四军医大学学报;2004年06期 |
| 8 |
林巍巍,陈罡,袁颖,王晓冬;大鼠骨髓基质干细胞的分离培养及鉴定的初步研究[J];交通医学;2003年05期 |
| 9 |
何亚峰,邓廉夫;骨髓基质干细胞的研究进展[J];国外医学.骨科学分册;2004年02期 |
| 10 |
董鸿铭,柏树令;小鼠骨髓基质干细胞的培养及常见的组化染色方法[J];中国医科大学学报;2004年04期 |
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