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《中国药学杂志》 2019年23期
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白木香转录因子AsWRKY25的分子克隆与表达分析

孙佩文  唐小琳  吕菲菲  余翠翠  王彬彬  高志晖  金钺  徐艳红  魏建和  
【摘要】:目的克隆和表达白木香(Aquilaria sinensis)转录因子基因AsWRKY25并进行特性分析,为深入研究其生物学功能奠定基础。方法以白木香愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模版,采用聚合酶链式反应技术(PCR)克隆基因CDS全长;通过生物信息学工具和软件分析编码蛋白的生物学特性,通过组织特异性表达分析不同组织中的基因表达模式。构建pET-28aAsWRKY25原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行原核诱导表达及鉴定。结果从白木香愈伤组织中克隆到了AsWRKY25转录因子基因,其CDS全长1 728 bp,编码575个氨基酸;该序列密码子优化后连接到pET-28a表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导表达,其适合诱导条件为1 mmol·L~(-1)IPTG,37℃连续培养6 h。组织表达分析结果表明,AsWRKY25在白木香的沉香层中的表达量最高,在根、茎、枝中的表达量最低。结论成功克隆并表达了白木香WRKY类转录因子As WRKY25,该转录因子可能参与了沉香的伤害诱导形成过程。

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