禽致病性大肠杆菌O2株跨膜输出蛋白基因组文库的构建与分析

【摘要】：为构建禽致病性大肠杆菌(APEC)跨膜输出蛋白基因组文库,本研究以APEC O2菌株基因组DNA为模板,采用基因随机片段PCR方法扩增,纯化约250 bp~500 bp的片段构建APEC O2菌株跨膜输出蛋白基因组文库。共获得约1.8×10~5个克隆容量的基因组文库,经氨苄/卡那/阿拉伯糖平板筛选到318个克隆。ORF及Signal P分析显示318个克隆插入片段均含有信号肽序列,其中,78个克隆预测为膜蛋白;启动子分析显示144个克隆含有完整启动子,除去29个能自主表达的克隆,推测其余115个克隆的启动子在实验培养条件下沉默,可能需要特殊条件诱导才能表达;GO功能分析克隆插入片段所对应全长基因的ORF显示,其参与的生物过程主要集中于定位、转运;从分子功能角度分析,其主要集中于催化和结合;从细胞组成角度分析,其主要集中于细胞膜、周间质、外膜等与外壳相关的结构中。本实验将为进一步研究APEC的致病性机理奠定基础。