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《中国兽医科学》 2011年09期
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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

曹彦琼  王先炜  李文良  姜平  
【摘要】:利用重组杆状病毒表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术,共获得6株能稳定分泌抗Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3H9/1H5、3H9/3C7、4A9/3E2、4A9/3D7、6G7/7B6和6G7/8D3,并通过ELISA、Western-blotting和间接免疫荧光试验(IFA)对6株单抗的特性和抗原表位进行分析鉴定。结果显示,6株杂交瘤细胞培养上清的抗体效价为1∶1 024~1∶2 048,腹水效价为1∶163 840~1∶204 800。3H9/1H5、3H9/3C7、6G7/7B6和6G7/8D3的亚型为IgG1型,4A9/3E2和4A9/3D7为IgG2b型,所有单抗的轻链均为κ型。Western-blotting和IFA结果表明6株单抗均能与重组Cap蛋白和PCV2产生特异性反应。相加ELISA结果显示,6株单抗可能识别不同的抗原表位。为准确鉴别不同单抗针对的抗原位点,以截短表达的重组Cap蛋白为抗原,进行Western-blot鉴定。结果显示,4A9/3E2与4A9/3D7的抗原表位位于101~150aa,其余4株单抗可能针对1~50aa或者天然构象表位。本研究获得6株PCV2Cap特异性单抗,鉴定了其识别的抗原表位,为PCV2诊断和致病机理的研究提供了工具。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 曹贵忠;;猪圆环病毒2型Cap蛋白的截短表达与活性检测[J];中国畜牧兽医;2012年08期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 琚春梅,陈焕春,刘正飞,曹胜波,何启盖;应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法[J];畜牧兽医学报;2004年06期
2 郭龙军;陆月华;黄立平;危艳武;刘长明;;猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定[J];中国农业科学;2010年07期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 洪伟彬;猪圆环病毒2型SH毒株增殖条件的优化与免疫原性稳定性研究[D];南京农业大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郝贵增;靳玉芬;;猪圆环病毒的分子生物学研究进展[J];安徽农业科学;2007年13期
2 陈杨;徐志文;郭万柱;陈弟诗;;猪圆环病毒2型的致病机理和疫苗研究进展[J];安徽农业科学;2007年18期
3 王岩;王新卫;侯春彬;张春霞;李文刚;;猪圆环病毒Ⅱ型ZZ株ORF2基因的扩增、测序与序列分析[J];安徽农业科学;2007年27期
4 马其国;商绍彬;申会刚;;猪圆环病毒2型诊断技术的研究进展[J];浙江畜牧兽医;2008年05期
5 郭春艳;葛俊伟;李一经;;猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达[J];东北农业大学学报;2009年06期
6 刘正飞,陈焕春,琚春梅,曹胜波;猪圆环病毒研究进展[J];动物医学进展;2002年02期
7 王忠田,杨汉春,吕艳丽;猪圆环病毒II型ORF2基因的克隆及序列分析[J];动物医学进展;2003年01期
8 梁红虎,罗满林,刘镇明;PCR对猪全血、血清、尿液和粪便中PCV2的检测[J];动物医学进展;2004年01期
9 张应国;张文东;宋建领;张富强;;猪圆环病毒基因组结构及其分子特征研究进展[J];动物医学进展;2006年07期
10 赵鸿雁;李俊;丛晓燕;曹帅;王文志;张秀美;王金宝;;PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建[J];动物医学进展;2006年11期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 朱凤霞;;猪圆环病毒的分子生物学研究进展[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
2 银梅;唐海蓉;陈桂香;王选年;王新华;;断奶仔猪多系统衰弱综合征[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
3 周继勇;申会刚;;猪圆环病毒研究概况[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
4 何逸民;齐岩;何兆祥;罗玉均;潘全会;孔留五;曹宗喜;张桂红;;猪圆环病毒2型ORF2的原核表达及抗原性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
5 吴志明;闫若潜;贾松涛;张志凌;张健;黄清;;猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在动物体内免疫效果研究[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
6 谢彩华;闫若潜;吴志明;张志凌;张健;陈涛;;猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集(2)[C];2009年
7 赵玉龙;焦玉兰;郁宏伟;李莹洁;;一种新型猪圆环病毒Ⅱ型ELISA检测试剂盒的临床应用[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
8 曾思遥;张淑琼;余绍华;唐志玲;陈瑞爱;罗满林;;TaqMan实时荧光定量PCR检测PCV2方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王忠田;猪圆环病毒2型ORF2基因表达及重组蛋白ELISA方法的建立[D];中国农业大学;2003年
2 芦银华;华东地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查及其感染性核酸的构建[D];南京农业大学;2003年
3 周双海;猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞功能的影响[D];中国农业大学;2004年
4 韩凌霞;猪圆环病毒2型基因的原核表达与单克隆抗体的制备及感染性分子克隆的动物接种试验[D];中国农业科学院;2003年
5 宋勤叶;表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白重组质粒的构建及免疫效应[D];中国农业大学;2005年
6 秦晓冰;PCV2核酸疫苗和重组鸡痘病毒疫苗的构建及实验免疫研究[D];吉林大学;2005年
7 肖驰;猪繁殖与呼吸道综合征、猪瘟和猪圆环病毒病诊断DNA微阵列的构建及其检测技术研究[D];四川农业大学;2005年
8 曹胜波;猪圆环病毒感染性分子克隆构建及siRNA对rep基因表达抑制研究[D];华中农业大学;2005年
9 琚春梅;猪2型圆环病毒ELISA诊断方法及猪2型圆环病毒-伪狂犬病病毒二价基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2005年
10 马友记;两种猪源病毒基因图谱绘制及分子免疫研究[D];甘肃农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 祁艳华;猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法的建立及PCV2单克隆抗体的制备[D];郑州大学;2010年
2 刘宗争;PCV2 ORF2基因在大肠杆菌中的表达及与PCV2灭活抗原免疫效果的比较[D];山东农业大学;2010年
3 李超;安徽地区猪圆环病毒2型的流行病学调查及地方株的特性研究[D];安徽农业大学;2010年
4 石运通;猪圆环病毒Ⅱ型核酸疫苗的构建及间接ELISA方法的建立[D];福建农林大学;2010年
5 翟少伦;猪群中三种新发小DNA病毒的分子流行病学研究[D];新疆农业大学;2010年
6 邵小雪;嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性[D];新疆农业大学;2010年
7 张伟;猪圆环病毒Ⅱ型新疆株的分离鉴定及ORF2基因的原核表达[D];新疆农业大学;2010年
8 傅昱;PCV2兰州分离株ORF2片段的序列分析与原核表达[D];甘肃农业大学;2010年
9 谈国蕾;猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因在原核和真核系统中的表达[D];南京农业大学;2003年
10 李栋梁;猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因在大肠杆菌中的克隆与表达[D];中国农业大学;2004年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 乔翠;高凤山;许崇波;;猪圆环病毒2型分子致病机理及相关疾病研究进展[J];中国畜牧兽医;2012年02期
2 马涛;王先炜;李玉峰;李文良;姜平;;不同佐剂对猪圆环病毒2型灭活抗原免疫效果的影响[J];中国兽医科学;2011年06期
3 史小红;徐志文;郭万柱;朱玲;年阳阳;古峰;李凤琴;;融合表达猪圆环病毒2型ORF1和ORF2基因真核质粒的构建及对小鼠的免疫原性[J];中国兽医学报;2011年09期
4 王文秀;沈志强;吕素芳;曲光刚;谢金文;董林;;猪圆环病毒2型ORF2与EGFP融合蛋白表达载体的构建及在鸭心肌细胞中的表达[J];中国兽医科学;2011年10期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曹胜波,陈焕春,肖少波,何启盖,徐引弟,刘军发;猪环状病毒2型的PCR检测方法的建立及应用[J];华中农业大学学报;2001年01期
2 王忠田,郭鑫,杨汉春,陈艳红,查振林;猪圆环病毒2型BF株ORF2基因在大肠杆菌中的表达[J];农业生物技术学报;2005年02期
3 刘丽霞;沈国顺;;猪圆环病毒研究进展[J];畜牧兽医杂志;2007年02期
4 俞莉俐;姜平;冯志新;;猪圆环病毒2型Cap羧基端多肽原核表达及抗原性分析[J];畜牧与兽医;2006年11期
5 王先炜;姜平;李玉峰;蒋文明;汤景元;;猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建与鉴定[J];Virologica Sinica;2006年01期
6 郎洪武,张广川,吴发权,张创贵;断奶猪多系统衰弱综合征血清抗体检测[J];中国兽医科技;2000年03期
7 郎洪武,王力,张广川,程君生,宋立;猪圆环病毒分离鉴定及猪断奶多系统衰弱综合征的诊断[J];中国兽医科技;2001年03期
8 芦银华,陈德胜,戴亚斌,陈溥言;应用复合PCR法检测猪圆环病毒[J];中国兽医科技;2001年09期
9 芦银华,谈国蕾,华修国,陈德胜,陈溥言;应用间接免疫荧光试验检测猪圆环病毒抗体[J];中国兽医科技;2002年08期
10 黄立平;刘长明;危艳武;张朝霞;陆月华;郭龙军;;抗猪圆环病毒2型Cap蛋白中和性单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国预防兽医学报;2009年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏巍;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林;;猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国兽医杂志;2007年11期
2 黄立平;刘长明;危艳武;张朝霞;陆月华;郭龙军;;抗猪圆环病毒2型Cap蛋白中和性单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国预防兽医学报;2009年02期
3 梁辰;张勇;刘强;马晶;苗丽娟;;2型猪圆环病毒ORF2基因的原核表达[J];吉林农业科技学院学报;2010年03期
4 苗丽娟;符芳;王小武;陈微晶;鲁晶红;李曦;;猪圆环病毒2型去核定位信号ORF2基因的原核表达与初步应用[J];中国预防兽医学报;2008年05期
5 郭龙军;陆月华;黄立平;危艳武;刘长明;;猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定[J];中国农业科学;2010年07期
6 李海忠;符芳;张永欣;李曦;宋淑萍;;Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定[J];黑龙江畜牧兽医;2010年05期
7 邢福珊;许信刚;童德文;王志昇;张彦明;;猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状病毒表面的展示[J];中国兽医杂志;2010年12期
8 崔立;朱建国;芦银华;谈国蕾;陈溥言;华修国;;猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建及表达[J];上海交通大学学报(农业科学版);2005年04期
9 车勇良;周伦江;王隆柏;魏宏;陈少莺;陈如敬;庄向生;;猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体的制备及应用[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年03期
10 敬晓棋;吴发兴;丛丽媛;张佩君;陈德坤;;猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
3 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
4 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
5 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
6 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄子逸;LIGHT基因转染细胞株和单克隆抗体的研制及其对T细胞的共刺激效应[D];苏州大学;2010年
2 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年
3 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年
4 郑杰;分泌抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年
5 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年
6 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年
7 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年
8 贾娟娟;抗胰岛素单克隆抗体的研制及酶联免疫分析方法的建立[D];中国原子能科学研究院;2005年
9 李彬;TLR4单克隆抗体诱导同种心脏移植免疫耐受的研究[D];苏州大学;2010年
10 王雨晨;伏马毒素B_1单克隆抗体的制备及多种免疫学检测方法的建立[D];上海交通大学;2011年
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