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《中国动物检疫》 2007年02期
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口蹄疫病毒VP1基因的克隆及结构蛋白VP1的原核表达

董志强  张志  李晓成  陈德坤  洪军  张燕霞  黄保续  
【摘要】:根据Genbank中的O型口蹄疫病毒全基因序列设计了一对扩增口蹄疫病毒VP1基因的引物,用该特异性表达引物从口蹄疫阳性质粒pMD-P1中扩增得到目的基因VP1(639bp),用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体PET32a后构建重组表达载体,转化宿主菌BL21(DE3),经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1结构蛋白在大肠杆菌中表达量较高,表达产物的分子量约为41Ku,并能被口蹄疫阳性血清所识别,经分析表达蛋白约占菌体蛋白的34%。口蹄疫病毒VP1蛋白在大肠杆菌中高效表达且表达产物具有免疫原性。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 王荣;孔繁德;吴德峰;徐淑菲;;斑点免疫金渗滤法同时检测猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究[J];生物技术通报;2009年01期
2 孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲;;多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用[J];生物技术通报;2009年01期
3 任宪刚;薛飞;朱远茂;冯军科;史鸿飞;高欲燃;;O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备[J];中国预防兽医学报;2009年07期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 任宪刚;表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组牛疱疹病毒1型的构建及其在兔体内的免疫原性研究[D];中国农业科学院;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
6 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
8 葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期
9 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期
10 朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
3 刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
4 张海龙;田兆丰;董志;张晏如;张飞云;;多花黑麦草斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年
5 闫云君;蔡勇;杨江科;;基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(一)[C];2007年
6 李玫;廖宝文;;红树林湿地烷烃降解菌的分离筛选[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年
7 郭奕斌;陈路明;孟亚仙;王晶晶;杜传书;潘敬新;;一个广东四川家庭的IDS基因新突变[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
8 于占东;赵双宜;何启伟;王翠花;牟晋华;刘春香;;抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
9 龚束芳;杨涛;车代弟;;偃麦草根茎非质体蛋白质修饰冰晶能力的观察[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年
10 王英;滕齐辉;曹慧;胡锋;崔中利;;淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
3 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
4 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年
6 生书晶;何首乌芪合酶基因(FmSTS)的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
7 梁东;苹果山梨醇代谢相关基因的分子特性研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 温武军;鲤抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山东师范大学;2011年
10 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶(CBHⅠ、CBHⅡ)和内切葡聚糖酶(EGⅠ)的分子改造[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年
2 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年
4 王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年
5 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
6 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年
7 龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年
8 刘源;猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/narP突变株构建及功能研究[D];华中农业大学;2010年
9 李善文;蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响[D];南京医科大学;2009年
10 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈焕春,周复春,方六荣,何启盖,吴斌,洪文洲;伪狂犬病病毒鄂A株TK~-/gG~-/LacZ~+突变株的构建[J];病毒学报;2001年01期
2 张永光,吕建亮,王永录,方玉珍,蒋守田,张维德,刘湘涛,潘丽,刘力宽,裴仉福;口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究[J];病毒学报;2004年04期
3 朱晶晶;魏玉荣;符子华;易忠;;口蹄疫病毒VP1基因研究进展[J];动物医学进展;2008年07期
4 黄印尧,张长弓,方莹,金颜辉;用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究[J];福建畜牧兽医;2002年01期
5 李润成;余兴龙;白霞;侯强红;罗维;刘忠华;向卫军;;O型口蹄疫病毒代表性抗原VP1基因的人工合成与表达及其免疫原性检测[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2008年03期
6 杨建功;王秀君;;猪高致病性蓝耳病的诊断与防控措施[J];湖北畜牧兽医;2007年07期
7 张显升,刘在新,赵启组,常惠芸,谢庆阁;口蹄疫病毒China/99基因组RNA序列测定及比较分析[J];中国科学(C辑:生命科学);2003年05期
8 金宁一,张洪勇,尹革芬,郑敏,刘彤,江文正,李子健;共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性[J];科学通报;2004年06期
9 冉波;邵明玉;张培因;冯宇;卫红飞;王莉;王燕媚;胡大利;王丽颖;于永利;;O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗的构建、表达和纯化[J];免疫学杂志;2006年03期
10 姜平;陈溥言;蔡宝祥;;计算机在IBDV主要结构蛋白基因PCR引物设计中的应用[J];南京农业大学学报;1996年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈关平;O型口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘成都;邱庆崇;耿晓雪;李伟;;黄鳝抗菌肽hepcidin基因大肠杆菌表达载体的构建[J];安徽农业科学;2011年09期
2 贾宁;闫中强;刘刚;沈定霞;索继江;邢玉斌;高岩;刘运喜;;免疫渗滤与胶体金快速检测在筛查甲型流感中诊断效率分析[J];南方医科大学学报;2010年10期
3 谭晓妮;张彦明;张旭;邓力;;接种猪瘟兔化弱毒株的永生化猪血管内皮细胞传代情况研究[J];动物医学进展;2010年07期
4 李圣;郑欢莉;李红炳;孔令富;张晓敏;钏有科;孙永科;杨玉艾;;一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用[J];动物医学进展;2011年06期
5 莫胜兰;施开创;胡杰;邹联斌;陆文俊;李军;;猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立[J];动物医学进展;2012年09期
6 路斌;王一成;吴润;袁秀芳;徐丽华;李军星;王朝文;;猪主要RNA病毒病多重二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J];华北农学报;2010年06期
7 许欣;王锋;;免疫胶体金技术及其在临床诊断上的研究进展[J];江西农业学报;2009年06期
8 黄克朗;吉立能;;猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法[J];畜牧与饲料科学;2011年12期
9 屈满义;;高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的研究[J];农业灾害研究;2011年01期
10 赵绪永;宁豫昌;赵丽;马辉;;多重实时定量PCR快速检测PRRSV、CSFV和PCV2混合感染方法的建立[J];河南农业科学;2013年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 董代幸;乌鲁木齐地区马铃薯病毒和类病毒的分子鉴定及检测技术研究[D];新疆农业大学;2010年
2 陈一鸣;猪繁殖与呼吸综合征抗体免疫胶体金快速诊断试纸的研制[D];四川农业大学;2011年
3 路斌;猪主要RNA病毒病快速多联RT-PCR诊断技术研究[D];甘肃农业大学;2011年
4 许欣;湖羊早期妊娠诊断免疫胶体金层析试纸条的初步研制[D];南京农业大学;2010年
5 易兵;猪肺炎支原体免疫胶体金快速诊断试纸的研制[D];四川农业大学;2010年
6 杨旭东;大肠杆菌F5菌毛胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用[D];东北农业大学;2010年
7 唐佳佳;重金属Cu~(2+)免疫层析胶体金试纸条的研制[D];吉林大学;2012年
8 赵日浪;同时检测美洲型及欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒多重RT-PCR方法的建立与应用[D];广西大学;2012年
9 刘阳;副溶血弧菌和溶藻弧菌快速检测体系的建立与应用[D];福建农林大学;2012年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘铀,毕英佐,马静云,曹永长;口蹄疫病毒VP1植物表达载体的构建[J];湛江海洋大学学报;2004年04期
2 葛淑敏,金宁一,尹革芬,郑敏,王振国,马鸣潇;6株O型口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因的克隆与序列分析[J];中国病毒学;2004年03期
3 朱晶晶;魏玉荣;符子华;易忠;;口蹄疫病毒VP1基因研究进展[J];动物医学进展;2008年07期
4 独军政,常惠芸,宋立荣,李冬,丛国正,林彤,邵军军,刘在新,谢庆阁;AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因和牛α-干扰素基因的融合表达[J];中国兽医科技;2005年02期
5 潘丽;张永光;王永录;方玉珍;蒋守田;王宝琴;王文秀;王炜;孙元;吕建亮;谢庆阁;;口蹄疫病毒VP1基因在转基因拟南芥种子中的表达及活性检测[J];畜牧兽医学报;2006年05期
6 凌连军;张培君;李永清;龚玉梅;;O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及原核表达载体构建[J];动物医学进展;2006年08期
7 李浩波;马静云;李大旭;王玲玲;谢青梅;毕英佐;;3株O型FMDV VP1基因的克隆与序列分析[J];动物医学进展;2008年04期
8 王海烽;易忠;魏玉荣;胡尔马西;符子华;;O型口蹄疫病毒VP1基因在2种原核表达载体上的表达[J];中国畜牧兽医;2009年10期
9 杨彬,刘在新,胡永浩,谢庆阁;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达[J];中国兽医科技;2003年03期
10 赵毅;雷震;王玉红;刘宏;马文戈;黄炯;符子华;易中;薛英;;口蹄疫病毒灭活疫苗中VP1基因RNA抽提方法的建立[J];中国畜牧兽医;2009年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 钱平;陈焕春;李祥敏;金梅林;何启盖;顾贫;洪琦;;口蹄疫病毒VP1基因抗原表位在大肠杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
2 沈政;;口蹄疫病毒持续感染分离物VP1基因克隆及测序[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十一次兽医病理学、第十次动物病理生理学学术研讨会论文集[C];2001年
3 郑敏;金宁一;鲁会军;韩松;金扩世;李昌;;O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
4 郑敏;金宁一;鲁会军;韩松;李昌;金扩世;;C型口蹄疫病毒VP1基因的串联与原核表达[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
5 韩松;金宁一;鲁会军;;0型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其在重组杆状病毒中的表达[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
6 杨鑫;王红宁;周英顺;高荣;曾博;徐昌文;丁梦蝶;;猪源O型口蹄疫病毒分离株VP1基因特征分析[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
7 鲁会军;韩松;郑敏;李旭;李昌;金扩世;金宁一;;口蹄疫病毒泛亚株VP1基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
8 邬苏晓;刘镇明;罗满林;戚一达;;口蹄疫病毒3ABC基因的原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
9 马鸣潇;金宁一;霍晓伟;金明兰;沈国顺;;口蹄疫病毒三价核酸疫苗分子设计与免疫原性研究[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
10 邱杨;肖性龙;刘建丽;李惠芳;张经纬;余以刚;吴晖;;口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 江南雪舞;谈谈口蹄疫病毒[N];大众卫生报;2005年
2 吴星;口蹄疫对农产品市场的影响[N];期货日报;2005年
3 廖学时;构建感染性口蹄疫病毒粒子成功[N];医药导报(中药报);2004年
4 河北省畜牧兽医站 韩庆安(高级兽医师);春防牲畜口蹄疫[N];河北科技报;2006年
5 罗学宏;“手足口病”不是“口蹄疫”[N];家庭医生报;2007年
6 本报记者 刘丁;口蹄疫阴影下的“英国病人”[N];华夏时报;2007年
7 ;猪口蹄疫病的诊治[N];中国畜牧兽医报;2008年
8 刘书梅;春季应做好猪口蹄疫的防治工作[N];河南科技报;2007年
9 刘晔;“山羊绒洗净因素对口蹄疫病毒影响”通过鉴定[N];中国国门时报;2008年
10 ;口蹄疫[N];中国畜牧兽医报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴雨霞;口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因在原核和真核细胞中的表达[D];甘肃农业大学;2003年
2 李勇;口蹄疫病毒3C(D)蛋白与宿主细胞因子Fascin-1相互作用研究[D];武汉大学;2010年
3 孙萌;口蹄疫病毒VP1抗原基因在模式植物叶绿体中的重组和表达[D];浙江大学;2003年
4 张虎;口蹄疫病毒持续感染BHK-21细胞的转录调控研究[D];武汉大学;2013年
5 朱远茂;表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组牛疱疹病毒1型的构建及其免疫研究[D];东北农业大学;2010年
6 邵寒娟;A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D];厦门大学;2004年
7 白兴文;我国O型泛亚1系口蹄疫病毒表型差异的分子基础[D];中国农业科学院;2012年
8 洪琦;口蹄疫—伪狂犬病二价与口蹄疫—猪细小—伪狂犬病三价基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2005年
9 潘丽;口蹄疫病毒免疫原基因在番茄和拟南芥中的表达及转基因番茄动物免疫试验[D];中国农业科学院;2005年
10 易建中;抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重组双价多肽疫苗研究[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王钢;口蹄疫病毒VP1基因的序列分析及巢式PCR检测研究[D];四川农业大学;2005年
2 赵毅;口蹄疫灭活疫苗中VP1基因分析方法的建立及应用[D];新疆农业大学;2009年
3 刘进;口蹄疫病毒VP1基因的克隆表达及细胞因子检测研究[D];新疆农业大学;2003年
4 裴仉福;A型口蹄疫病毒结构蛋白VP_1基因的克隆及其在E.coli中的表达[D];甘肃农业大学;2004年
5 张先锋;口蹄疫病毒非结构蛋白基因3ABC、3AB、3A的克隆表达及3A蛋白间接ELISA方法的初步建立[D];新疆农业大学;2010年
6 裴志花;牛O型口蹄疫病毒内蒙古疫苗株p1基因的克隆与序列分析[D];内蒙古农业大学;2005年
7 金华利;口蹄疫病毒vp1体外表达和DNA疫苗免疫效果的研究[D];新疆大学;2004年
8 孙琳;MUC1肿瘤抗原和口蹄疫病毒抗体检测方法的建立[D];吉林大学;2004年
9 田飞鹏;杆状病毒介导O型口蹄疫病毒P12A和3C基因在Sf9细胞和BHK细胞中的共表达[D];西北农林科技大学;2010年
10 杜宇;猪O型口蹄疫病毒VP_1基因的原核表达及重组蛋白的反应原性检测[D];山西农业大学;2005年
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