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《中草药》 2017年05期
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川西獐牙菜牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及表达分析

向蓓蓓  李晓雪  王勇  田晓轩  杨琳  马琳  
【摘要】:目的从川西獐牙菜Swertia mussotii中克隆牻牛儿基焦磷酸合成酶(Sm GPPS)编码基因,并进行生物信息分析及该基因的表达研究。方法根据川西獐牙菜转录组Sm GPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到c DNA序列,通过生物信息对该序列进行分析;构建原核表达载体p ET-28a-Sm GPPS,转入大肠杆菌BL-21(DE3)中,在37℃、1 mmol/L IPTG诱导下进行表达。采用半定量RT-PCR方法检测Sm GPPS基因在川西獐牙菜不同组织中的表达强度。结果 Sm GPPS c DNA全长1 119bp,编码372个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。Sm GPPS蛋白与其他植物中GPPS蛋白具有高度的相似性。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。半定量RT-PCR结果表明Sm GPPS在叶中表达量最高。结论为进一步研究该基因的功能和利用基因工程手段提高川西獐牙菜中环烯醚萜类化合物产量提供了基础。
【作者单位】天津中医药大学中药学院;南开大学生命科学学院;天津中医药大学中医药研究院;天津师范大学生命科学学院;
【基金】:国家自然基金资助项目(81303303) 天津市高等学校科技发展基金计划项目(20130203)
【分类号】:S567.219;Q943.2
【正文快照】:
藏药川西獐牙菜Swertia mussotii Franch为龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属Swertia L.植物,为青藏高原特有种,分布于西藏、青海海拔3 800~5 000m的高寒地区,为藏族民间常用的一种草药,称为“藏茵陈”。藏茵陈是中华民族药中的瑰宝,是青藏高原中藏药八珍之一,是藏医学经典著作《

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