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《中草药》 2016年20期
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川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模和定点突变

俞继华  李洋洋  宋婧  李娟娟  张赶  朱建全  向缅  王万军  廖海  周嘉裕  
【摘要】:目的构建川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(Ligusticum chuanxiong caffeic acid-3-O-methyltransferase,LCCOMT)的三维模型,并利用定点突变对模型进行验证。方法利用同源建模构建LCCOMT的初始三维模型;对初始三维模型进行动力学优化;将优化后的模型对接咖啡酸,预测LCCOMT的活性位点;对预测的活性位点展开定点突变,检测突变型蛋白的生物活性。结果 LCCOMT的三维模型能够与咖啡酸成功对接,His268残基可能是LCCOMT的活性位点,推测其能够与咖啡酸3-OH形成氢键。H268N与H268Q2种突变酶分别丧失94.85%和95.28%的催促活性。结论同源建模能够准确预测LCCOMT的三维模型。His268为LCCOMT的关键氨基酸残基,其作用可能是作为共轭碱,参与咖啡酸3-OH的去质子化反应。

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