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《中国病理生理杂志》 2003年06期
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纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定

余榕捷  谢秋玲  洪岸  汪炬  孙奋勇  
【摘要】:目的 :利用基因工程技术 ,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌。方法 :利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原 (pro-NK)基因 ,并克隆到表达载体pET3c上 ,构建表达pro -NK和载体上 2 2氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK ;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL2 1(DE3)pLysS-和BL2 1(DE3)pLysS+ ,获得表达菌pENK - (DE3)pLysS-和pENK - (DE3)pLysS+ 。利用SDS -PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性。结果 :SDS-PAGE显示两株菌株均表达 4 2kD的目的蛋白。纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性。在pENK -(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导就有基础表达 ,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解 ,菌落中空 ,表明表达产物具细胞毒作用。结论 :本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro -NK融合蛋白 ,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础。

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 齐海萍;豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究[D];江南大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 孙立娜;纳豆激酶基因在酿酒酵母中表达的研究[D];东北林业大学;2007年
2 马明;产纳豆激酶菌株的分离筛选与鉴定[D];山东农业大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的发酵工艺研究[J];氨基酸和生物资源;2001年02期
2 梁剑光,熊晓辉,熊强;微生物代谢产物在溶栓药物制备中的应用研究进展[J];氨基酸和生物资源;2003年02期
3 鲍艳霞,陈钧,王萍;影响纳豆激酶酶促反应速度因素的研究[J];氨基酸和生物资源;2004年03期
4 江晓,董明盛,江汉湖,陈伯祥;产溶栓酶纳豆菌的筛选及特性的研究[J];安徽农业技术师范学院学报;2000年02期
5 王峰;李术娜;朱宝成;武翠红;袁洪水;;W-15菌株产生的纤溶酶蛋白的提取与纯化[J];河北农业大学学报;2007年01期
6 张玉晶,张苓花,叶云生,王运吉;重组纳豆激酶工程酵母菌发酵研究[J];大连轻工业学院学报;2004年02期
7 郎亚军,隋海澜,于育玲,张苓花;纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化[J];大连轻工业学院学报;2005年01期
8 彭勇,张义正;豆豉溶栓酶产生菌的筛选及其酶学性质的初步研究[J];高技术通讯;2002年02期
9 陆瑾,赵珺,林东强,姚善泾;金属螯合双水相亲和分配技术分离纳豆激酶的研究[J];高校化学工程学报;2004年04期
10 高大海;梅乐和;盛清;许静;林东强;姚善泾;;硫酸铵沉淀和层析法分离纯化纳豆激酶的研究[J];高校化学工程学报;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 Tatsumi Eizo;Yamaki Koji;;Acetylcholinesterase Inhibitory Activities of Douchi, a Traditional Chinese Food[A];都市农业工程科技创新与发展——2005北京都市农业工程科技创新与发展国际学术研讨会论文集(Ⅰ)[C];2005年
2 ;益生菌研究进展及在食品工业中的应用[A];第十一届中国国际食品添加剂和配料展览会学术论文集[C];2007年
3 Jun-Guo Liu 1,2 , Jian-Min Xing 1, Rui Shen 1, Cheng-Li Yang 1, Hui-Zhou Liu 1, * 1 Laboratory of Separation Science and Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing, 100080, China 2 Department of Bioscience and Bioengineering, Hebei University of Science and Technology, Shijiazhuang, Hebei Province, 050018, China;PURIFICATION AND CONCENTRATION OF NATTOKINASE BY REVERSE MICELLES EXTRACTION FROM FERMENTATION BROTH[A];Proceedings of International Solvent Extraction Conference 2005[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭勇;豆豉溶栓酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2002年
2 雷引林;球形纤维素/钛白粉复合扩张床吸附剂的制备及其在蛋白质纯化中的应用[D];浙江大学;2003年
3 张立央;SA/CS-CaCl_2/PMCG微胶囊及其固定化微生物细胞的培养[D];浙江大学;2003年
4 刘晓兰;根霉纤溶酶发酵、纯化和酶学性质研究[D];天津科技大学;2004年
5 高柱虎;两种新型多功能纤溶酶的鉴定及其分子生物学特性研究[D];武汉大学;2004年
6 冮洁;基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究[D];天津科技大学;2005年
7 刘东;根霉纤溶酶发酵过程优化及其溶栓作用的试验研究[D];天津科技大学;2005年
8 肖璐;溶栓酶基因的克隆及表达[D];四川大学;2005年
9 齐海萍;豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究[D];江南大学;2004年
10 张仁怀;豆豉溶栓酶的表达、复性、纯化及其药理学研究[D];四川大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梁思宇;枯草杆菌溶纤酶高产菌株的选育及发酵条件的优化[D];南京农业大学;2000年
2 刘诚;纳豆激酶液体发酵条件及其酶学稳定性研究[D];南京农业大学;2000年
3 田艳;纳豆菌液体发酵产生纤溶酶的研究[D];华南热带农业大学;2001年
4 张勇;离子诱变选育纤溶酶(Plasmin)高产菌以及部分酶学性质研究[D];四川大学;2002年
5 章小忠;纤维素硫酸钠制备工艺的放大和产纳豆激酶枯草杆菌微胶囊培养研究[D];浙江大学;2003年
6 胡升;新型溶栓酶——纳豆激酶的基础研究[D];浙江大学;2003年
7 倪剑锋;BN137菌株发酵产纳豆激酶的条件及酶的分离纯化、理化性质的研究[D];沈阳药科大学;2002年
8 温晓明;溶血栓作用的纳豆激酶基因导入莴苣植株的研究[D];广西大学;2003年
9 张利;纳豆激酶溶血栓作用及作用机理的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
10 王俊菊;纳豆激酶抗凝血作用的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王肇悦;张峰;何秀萍;张博润;;自克隆技术在工业啤酒酵母改良中的研究概况[J];微生物学通报;2006年06期
2 胡景柱,夏寿华,吴林;纳豆冻干粉的安全性研究[J];安徽农业科学;2000年03期
3 王正刚,丁贵平,蔡正森;纳豆激酶的发酵工艺研究[J];氨基酸和生物资源;2001年02期
4 丁贵平,蔡正森,王正刚;纳豆激酶的分离纯化及生化研究[J];氨基酸和生物资源;2001年03期
5 宋关斌,李清漪;夏威环毛蚓纤溶酶的分离纯化及部分性质研究[J];动物学报;1996年02期
6 薄金岭;纳豆激酶高产菌株的筛选及发酵条件的优化[J];大豆通报;2004年02期
7 张玉晶,张苓花,叶云生,王运吉;重组纳豆激酶工程酵母菌发酵研究[J];大连轻工业学院学报;2004年02期
8 黄志立,罗立新,凌均建,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];广东药学院学报;2000年04期
9 黄志立,罗立新,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因重组质粒在大肠杆菌与毕赤酵母中的稳定性[J];广东药学院学报;2001年04期
10 彭勇,张义正;豆豉溶栓酶产生菌的筛选及其酶学性质的初步研究[J];高技术通讯;2002年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 朱立成;纳豆激酶和hGM-CSF在家蚕杆状病毒表达系统中表达纯化及活性研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 孙立娜;纳豆激酶基因在酿酒酵母中表达的研究[D];东北林业大学;2007年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 郑丽伟;纤溶酶高产菌株的分离筛选、发酵产酶及酶学性质的研究[D];河北农业大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 付利,杨志兴;纳豆激酶的研究与应用[J];生物工程进展;1995年05期
2 黄志立,罗立新,杨汝德,梁世中;纳豆激酶[J];生命的化学;2000年02期
3 张淑梅,李晶,王玉霞,王佳龙,赵晓宇;纳豆激酶基因工程研究进展[J];中国生物工程杂志;2003年09期
4 陈丽娟,沙长青,任永春,奚新伟,王佳龙;纳豆激酶溶解血栓机制[J];中国生物工程杂志;2003年04期
5 鲍艳霞,陈钧,王萍;影响纳豆激酶酶促反应速度因素的研究[J];氨基酸和生物资源;2004年03期
6 任静,杨子平,费来玺,李蕾;用丝列霉素-C诱导法检测鼠疫菌的溶源性[J];地方病通报;1988年01期
7 谢秋玲,郭勇;纳豆激酶液体发酵条件的优化[J];华南理工大学学报(自然科学版);1999年05期
8 许芳,冯建成,李洁,石衍君,杨艳燕;重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究[J];湖北大学学报(自然科学版);2004年01期
9 郎亚军,隋海澜,于育玲,张苓花;纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化[J];大连轻工业学院学报;2005年01期
10 丁贵平,蔡正森,王正刚;纳豆激酶的分离纯化及生化研究[J];氨基酸和生物资源;2001年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 伍树明;钟瑾;还连栋;;纳豆激酶S3位点的定点突变及突变体的分析[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
2 杨艳燕;李晓翔;熊少伶;张静;;豆豉纳豆激酶基因的高效表达研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
3 梁小波;钟瑾;还连栋;;纳豆激酶基因在乳酸乳球菌中的诱导表达[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
4 张秀红;孔健;曲音波;;中国市售酸奶中保加利亚乳杆菌温和噬菌体的分离及其分子生物学性质的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
5 耿晶;贺明慧;王菲;陈向东;;黑色素对苏云金芽孢杆菌及其紫外诱导性的影响[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
6 夏炉明;孙建和;严亚贤;;大肠杆菌O157溶源性Stx噬菌体的诱导及鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
7 梅运军;陈锦;孙东昌;杨洋;陈东;陈向东;沈萍;;一株嗜盐古菌噬菌体的诱导及其性质的初步研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
8 陆兆新;;枯草杆菌溶纤酶的研究进展[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
9 乔军;孟庆玲;;单核细胞增生李斯特菌噬菌体[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
10 刘晨光;刘成圣;贺君;刘万顺;;海洋假单胞菌血纤维蛋白溶酶分离纯化及部分性质研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 刘朔;纳豆激酶基因密码子优化设计与合成及在毕赤酵母中的高效表达[D];南京农业大学;2007年
2 郑忠亮;纳豆激酶结构与功能的研究[D];武汉大学;2005年
3 谢秋玲;纳豆激酶液体发酵的条件优化及其调控的研究[D];华南理工大学;1999年
4 程凯;噬藻体PP种群动力学和淡水浮游病毒生态学研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
5 朱立成;纳豆激酶和hGM-CSF在家蚕杆状病毒表达系统中表达纯化及活性研究[D];浙江大学;2005年
6 范晓丹;新型纤溶酶得产生菌选育、发酵优化及酶学性质研究[D];华南理工大学;2006年
7 华颖;纤维蛋白溶解酶的发酵制备、分离纯化及酶学性质研究[D];江南大学;2008年
8 彭勇;豆豉溶栓酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李莹;纳豆激酶的基因工程制备[D];重庆师范大学;2010年
2 梁剑光;纳豆激酶发酵控制及其酶学特性研究[D];南京工业大学;2003年
3 倪剑锋;BN137菌株发酵产纳豆激酶的条件及酶的分离纯化、理化性质的研究[D];沈阳药科大学;2002年
4 宋照雷;E.coli中高效表达外源蛋白的探索及其在纳豆激酶中的应用[D];暨南大学;2002年
5 陈寅;appA植酸酶基因与纳豆激酶基因的克隆与表达研究[D];中国农业科学院;2003年
6 张旭;溶栓酶产生菌的分离筛选鉴定及发酵、提纯研究[D];华中科技大学;2009年
7 郭晓燕;细胞固定化生产纳豆激酶的研究及细胞固定化反应器的设计[D];南昌大学;2006年
8 张锋;纳豆激酶植物表达载体的构建及番茄遗传转化体系的建立[D];西北农林科技大学;2005年
9 余凤云;重组乳酸乳球菌表达纳豆激酶的研究[D];武汉工业学院;2011年
10 孙立娜;纳豆激酶基因在酿酒酵母中表达的研究[D];东北林业大学;2007年
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