收藏本站
《药学学报》 2015年01期
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

利用反义RNA技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达

王庆华  高丽丽  梁会超  杜国华  巩婷  杨金玲  朱平  
【摘要】:羊毛甾醇合酶催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点,下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此,本研究根据酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因(lanosterol synthase gene,erg7)序列设计引物,扩增5'长片段(包括erg7基因5'非编码区启动子序列和部分编码区序列)、5'短片段(包括erg7基因5'非编码区部分启动子序列和部分编码区序列)和erg7基因编码区片段,分别将其反向克隆到表达载体p ESC-URA上,构建反义表达质粒。用反义表达质粒转化酿酒酵母INVSc1,在营养缺陷型培养基SD-URA上筛选重组菌株。通过半定量PCR进行检测,结果表明:与INVSc1相比,转入erg7基因编码区反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显著变化,而转入5'长反义片段和5'短反义片段的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与INVSc1相比,转入5'短反义片段和erg7基因编码区反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量没有显著变化,而转入5'长反义片段的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA技术抑制酿酒酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达,为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物代谢途径奠定了基础。

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 王海;王小兰;周玉萍;段俊;田长恩;;拟南芥光敏色素A反义RNA载体的构建及转化[J];广西植物;2009年05期
2 张毅,刘彦,王红,叶和春,李国凤;转青蒿反义鲨烯合酶基因对烟草鲨烯合酶基因表达的影响[J];农业生物技术学报;2005年04期
3 周玲艳;姜大刚;李静;周海;庄楚雄;;水稻蜡质合成相关基因OsCER4自身启动子驱动的反义RNA转化植株获得[J];华南农业大学学报;2013年01期
4 秦玉芝;赵小英;邓克勤;李旭;刘选明;;甾醇生物合成中的关键酶—环氧角鲨烯环化酶的分子生物学研究[J];生命科学研究;2007年01期
5 谢和金,卢毅,邱咏梅,肖毅,郭建强,褚明辉,孙淑兰;高效液相色谱法测定酵母中麦角固醇含量[J];生物工程进展;2000年04期
6 雷洁;王瑞;张优优;张智英;;酿酒酵母ERG6基因缺失突变株的构建[J];西北农业学报;2012年03期
7 李云华,李修禄;用高效液相色谱法测定冬虫夏草及虫草乌鸡胶丸中麦角甾醇的含量[J];药学学报;1991年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 静一;罗安才;;青蒿素生物合成研究进展[J];安徽农业科学;2010年04期
2 常晶;郭春华;尹永志;江明锋;喻麟;徐亚欧;郑玉才;;青蒿鲨烯合酶cDNA的克隆与序列分析[J];安徽农业科学;2010年10期
3 吴秀群;文海浪;吴彩梅;;高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中麦角固醇[J];安徽农业科学;2010年33期
4 夏晓明;王金花;王开运;刘振龙;段海明;;反相高效液相色谱法分析禾谷丝核菌菌丝中麦角甾醇和羊毛甾醇的含量[J];分析化学;2007年02期
5 常晶;郭春华;尹永志;江明锋;喻麟;徐亚欧;郑玉才;;青蒿鲨烯合酶cDNA的克隆与序列分析(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年02期
6 薛冬桦,卢小霆,金花,侯林;生物合成麦角甾醇酵母菌株选育[J];长春工业大学学报(自然科学版);2003年03期
7 陆锦池;陈荣山;刘长辉;叶陈英;王海斌;何海斌;;浅述植物萜类物质的生物合成途径[J];农业科技通讯;2009年03期
8 张风侠;梁新华;王俊;;植物三萜皂苷生物合成及关键酶鲨烯合酶的研究进展[J];农业科学研究;2009年03期
9 曹立;谭军艳;许雯倩;马鸣;陈晓君;魏昕;;白念珠菌生物被膜耐药株麦角甾醇检测的方法学研究[J];口腔生物医学;2013年02期
10 张栋;史东林;张冠男;谢晓亮;贾东升;;基于冬虫夏草制剂的药物设计研究进展[J];科学技术与工程;2014年33期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 吴颖;辽东楤木三萜皂苷合成相关基因克隆及功能研究[D];吉林大学;2011年
2 夏晓明;禾谷丝核菌(Rhizoctonia Cerealis)对戊唑醇的抗性机制研究[D];山东农业大学;2006年
3 吴耀生;药用植物三七三萜合成途径功能酶特征与植物三萜合成通路分子进化[D];广西医科大学;2008年
4 李晔;RNA干扰三孢布拉氏霉菌番茄红素环化酶基因的研究[D];北京化工大学;2009年
5 侯春喜;人参皂苷生物合成关键酶基因MVD和βAS的克隆及βAS的反义表达[D];吉林大学;2009年
6 翟俊峰;吉林人参BIBAC基因组文库的构建及其在人参功能基因组研究上的应用[D];吉林农业大学;2013年
7 张楠;蛹虫草多肽通过PI3K/Akt/mTOR通路增强胃癌细胞株SGC-7901对氟尿嘧啶化疗敏感性的研究[D];吉林大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王剑平;云南红曲中主要活性成分的研究[D];昆明理工大学;2010年
2 成慧;龙牙楤木三萜皂苷生物合成途径中相关基因的研究[D];吉林大学;2011年
3 李冰;截短侧耳素生物合成的代谢调控与发酵优化[D];西南大学;2011年
4 秦国培;茶藨子叶状层菌的深层发酵及其菌丝质量标准研究[D];山东中医药大学;2011年
5 王晓明;黄芪鲨烯合酶基因的克隆[D];河北大学;2011年
6 尹腊梅;粘红酵母发酵生产辅酶Q_(10)的研究[D];北京化工大学;2011年
7 侯嵘;麻疯树毒素佛波醇酯合成途径关键酶基因的克隆与研究[D];复旦大学;2010年
8 叶蕻芝;三白草主要化学成分的分离检测及其对糖尿病的药效与药理研究[D];福州大学;2003年
9 阮婧华;冬虫夏草、人工蛹虫草内在质量研究[D];沈阳药科大学;2002年
10 周枝凤;化学计量学用于几种复杂中药体系分析及其指纹图谱的研究[D];中南大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈建,赵德刚;植物萜类生物合成相关酶类及其编码基因的研究进展[J];分子植物育种;2004年06期
2 王伟,崔红;不同光敏色素分子的特异感光性[J];广西植物;1999年04期
3 陈国庆,王武源,李忠超,王小兰;花粉管通道法转基因改良小麦品质的初步研究[J];广西植物;2005年03期
4 史文慧,林会兰,张广,孙智杰,陈国强;用分子生物学法提高酵母菌产乙醇的研究[J];工业微生物;2002年01期
5 周玲艳;秦华明;谢振文;;转基因水稻后代的遗传分析[J];湖北农业科学;2007年05期
6 张学文,罗泽民;拟南芥同源转换盒基因A21反义RNA基因重组体的构建及转化[J];湖南师范大学自然科学学报;2001年01期
7 刘乐承;余小林;叶纨芝;向珣;卢钢;曹家树;;Bc MF3反义基因植物表达载体的构建及其对拟南芥的遗传转化[J];长江大学学报(自科版);2005年11期
8 柴晓杰,王丕武,关淑艳,徐雅维;反义技术及其在植物基因工程中的应用[J];吉林农业大学学报;2004年05期
9 陈永金;林晓华;王艳尊;雷娟娟;黄建忠;;酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建[J];生物技术;2010年02期
10 刘俊,刘选明,秦玉芝,赵小英,唐冬英,赵李剑;Ri T-DNA对盾叶薯蓣的遗传转化及薯蓣皂甙元产生的影响(英文)[J];天然产物研究与开发;2005年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵明月;李治建;古力娜·达吾提;斯拉甫·艾白;;地锦草有效部位对红色毛癣菌羊毛甾醇生物合成的影响[J];中药药理与临床;2012年03期
2 赵明月;李治建;古力娜·达吾提;斯拉甫·艾白;;红色毛癣菌中羊毛甾醇含量的高效液相色谱法分析[J];时珍国医国药;2012年12期
3 于维林;朱元祺;刘蓬蓬;何宏;韩春华;;唑类耐药白色念珠菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶基因的研究[J];中国实验诊断学;2009年10期
4 季海涛,张万年,周有骏;抗真菌药物作用靶酶羊毛甾醇14α去甲基化酶研究[J];生物化学与生物物理进展;1999年02期
5 龙丰;羊毛甾醇脱甲基酶变化导致假丝酵母耐药的分子生物学研究进展[J];国外医药(抗生素分册);2001年05期
6 曹永兵,高平挥,张军东,徐铮,王彦,贾鑫明,张万年,姜远英;核素掺入研究氟康唑对真菌麦角甾醇生物合成的影响[J];第二军医大学学报;2004年07期
7 季海涛,张万年,周有骏,朱杰,吕加国,朱驹;白色念珠菌羊毛甾醇14α-去甲基化酶三维结构分子模型研究[J];生物化学与生物物理学报;1998年06期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 尚常华;赵明文;;灵芝羊毛甾醇合酶基因的克隆及其表达特性研究[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 王兰编译;日科学家确定促进合成胆固醇的蛋白质[N];大众科技报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 姚斌;基于羊毛甾醇14α去甲基化酶的新型抗真菌化合物的设计、合成与三维定量构效关系研究[D];第二军医大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026