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《中国药理学与毒理学杂志》 2012年04期
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酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼耐药K562细胞系的建立及其耐药特征

冯帆  张琼  刘洪英  李松  王莉莉  
【摘要】:目的建立酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(STI-571)耐药K562细胞系并研究其耐药特征。方法采用含递增浓度伊马替尼的培养基培养K562细胞,诱导耐伊马替尼K562细胞系(K562R)。通过细胞生长曲线、细胞形态和细胞凋亡分析确定耐药细胞是否形成;采用MTT法观察耐药细胞的耐药谱;通过半定量PCR和Western印迹法检测相关基因及蛋白的表达,并通过基因测序分析K562R细胞B细胞受体-c-Abelson(BCR-ABL)激酶区基因序列。结果成功地将伊马替尼高敏感的K562细胞诱导成K562R,伊马替尼抑制K562和K562R细胞存活的IC50值分别为0.01±0.00和(2.35±0.01)μmol·L-1,耐药倍数为235.0倍。K562R具有一定的交叉耐药性,对高三尖杉酯碱、长春新碱和对柔红霉素的耐药倍数分别为13.2,63.2和11.8倍。K562R可对抗伊马替尼诱导的细胞凋亡,伊马替尼1.0μmol·L-1培养24 h K562和K562R细胞凋亡率分别为72.1%和18.2%。耐药形成机制研究表明,与K562细胞相比,K562R细胞BCR-ABL基因、多药耐药基因(MDR)和p-糖蛋白基因(p-GP)的表达均明显增加。此外,K562R细胞BCR-ABL基因的第696位发生A→C点突变,该位点突变导致激酶区第231位氨基酸由赖氨酸取代原有的天冬酰胺。结论成功建立了耐伊马替尼细胞系K562R。K562R细胞具有交叉耐药性和对抗伊马替尼诱导的细胞凋亡等特征。K562R细胞BCR-ABL基因序列发生点突变,MDR和p-GP等基因表达亦明显升高。
【作者单位】军事医学科学院毒物药物研究所药物合成研究室;
【基金】:国家自然科学基金(30800323) 国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09501-031)~~
【分类号】:R733.72
【正文快照】:
慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)严重危害人类健康,约占白血病总数的15%[1]。研究表明,在CML中,淋巴细胞染色体发生了t(9;22)(q34;q11)易位[2],导致细胞内B细胞受体(B cell receptor,BCR)基因与c-Abelson(c-ABL)基因发生融合,即BCR基因的启动子和c-ABL基因

【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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