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‘红阳’猕猴桃cDNA文库构建及F3H基因的表达初探

杨红丽  王彦昌  姜正旺  黄宏文  
【摘要】:利用SMART(switching mechanism at 5 e′nd of the RNA transcript)技术构建了红肉猕猴桃品种‘红阳’(Actinidia chinesis cv‘Hongyang’)内果皮组织的全长cDNA文库,此文库的构建有助于克隆与次生代谢相关的基因,特别是红肉猕猴桃花青素特异合成代谢的基因。文库滴度为6.7×104 cfu/mL,库容为2.72×108 cfu/mL,文库重组率99.8%,插入片段多数分布在700~1 000 bp。随机挑选1 014个克隆进行测序,测序成功963个,经过序列拼接去除低质量序列后获得632个unigenes,包括92个contigs和540个singletons,获得已知功能unigenes共441个。从所测克隆中得到一个花青素途径的结构基因AcF3H,其cDNA序列长1 369 bp(GenBank登录号:FJ54 2819),CDS区为1 101 bp,编码366个氨基酸的多肽。与拟南芥、葡萄及龙胆已知F3H氨基酸序列比对,发现该基因十分保守。通过RT-PCR技术对苍溪栽培的不同发育时期‘红阳’猕猴桃果实AcF3H基因的表达进行了分析。结果表明,果肉转色前AcF3H基因表达量较高,而转色初期表达量降低,此后随着果实着色加深表达量维持在较高水平。

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