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《遗传学报》 2007年01期
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花生Δ~(12)脂肪酸脱氢酶基因高效表达载体构建与原核表达(英文)

殷冬梅  崔党群  贾斌  
【摘要】:花生是世界范围内广泛种植的重要油料作物之一,其种子中富含油酸和亚油酸。△12脂肪酸脱氢酶(FAD2)是亚油酸合成的关键酶,催化油酸(18:1)在△12位上脱氢生成亚油酸(18:2),但由于△12脂肪酸脱氢酶本身的特性,目前还没有有效的方法将其纯化并在蛋白水平作进一步的研究,尚需对其结构和功能之间以及表达调控进行更深入全面的研究。本文利用从花生中克隆的△12脂肪酸脱氢酶基因(GenBank接受号为AY1006)构建高效表达载体,把花生?12脂肪酸脱氢酶基因全长序列插入到大肠杆菌高效表达载体pRSETB中,构建了pRSET/HO-A融合表达载体,并转化到大肠杆菌表达菌BL21(DE3)pLysS中,在IPTG诱导下,pRSET/HO-A融合表达载体在BL21(DE3)pLysS菌株中高效表达了?12脂肪酸脱氢酶。利用Clon-Tech蛋白纯化Kit进一步分离了目的蛋白,同时加入外源性底物油酸在20℃温育6h后,进行脂肪酸甲酯化处理,通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,所编码的酶具有?12脂肪酸脱氢酶的活性,能将外源性的底物油酸转化为亚油酸,转化率为11.8%。花生△12脂肪酸脱氢酶基因的原核表达目前国内外还未见报导,本实验为其进一步的大量纯化和结构功能分析奠定了基础。

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 官玲亮;红花(Carthamus tinctorius L.)不同组织多不饱和脂肪酸积累模式及调控机制[D];四川农业大学;2011年
2 雷永;花生高油酸的分子遗传机制及其高效遗传改良体系构建[D];中国农业科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 毛若雨;毛霉Δ6-脂肪酸脱饱和酶基因启动子的克隆和功能鉴定[D];福建师范大学;2010年
2 于爱群;毛霉△~6-脱饱和酶基因及其5’端侧翼区域的克隆与功能鉴定[D];福建师范大学;2009年
3 邹燕;紫苏ALA积累模式及ω-3脂肪酸脱氢酶基因的克隆与原核表达[D];重庆师范大学;2012年
4 惠识瑶;花生ω-3脱氢酶基因克隆、表达及其活性分析[D];东北农业大学;2012年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘永红;张丽静;张洪荣;傅华;;△12-脂肪酸脱氢酶及其编码基因研究进展[J];草业学报;2011年03期
2 林萍;齐力旺;汪阳东;张守攻;;植物抗寒工程中脂肪酸去饱和酶研究进展[J];分子植物育种;2006年03期
3 唐三元;黄骥;张红生;管荣展;;播娘蒿油酸脱氢酶基因(DsFAD6)的克隆和表达分析(英文)[J];分子植物育种;2007年01期
4 高岩;郭东林;郭长虹;;三烯脂肪酸在高等植物逆境胁迫应答中的作用[J];分子植物育种;2010年02期
5 叶静;胡海涛;王长春;杨玲;;植物脂肪酸去饱和酶与抗冷性研究进展[J];广东农业科学;2011年12期
6 黄健扬;袁润高;;玉米抗寒基因研究进展[J];广东农业科学;2011年12期
7 刘春香;冷传远;刘福;;大白菜FAD8基因的克隆[J];华北农学报;2012年02期
8 李昌珠;李正茂;;植物脂肪酸的生物合成及其生理功能的研究进展[J];湖南林业科技;2009年06期
9 魏东,张学成;微藻脂肪酸去饱和酶及其基因表达的生态调控研究新进展[J];海洋科学;2000年08期
10 曹福亮;王欢利;郁万文;程华;;高等植物脂肪酸去饱和酶及编码基因研究进展[J];南京林业大学学报(自然科学版);2012年02期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 官玲亮;红花(Carthamus tinctorius L.)不同组织多不饱和脂肪酸积累模式及调控机制[D];四川农业大学;2011年
2 郝彦玲;甘蓝型油菜与向日葵高γ-亚麻酸基因工程研究[D];中国农业大学;2004年
3 张学杰;过量表达盐地碱蓬cDNA文库及SsNHX1-AVP1对拟南芥耐盐性的影响和盐地碱蓬FAD7基因cDNA的克隆与表达分析[D];山东师范大学;2004年
4 杨明峰;烟草NtFAD2基因的沉默及功能研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2005年
5 卿人韦;麻疯树(Jatropha curcas L.)脂质合成的酶基因克隆及功能研究[D];四川大学;2005年
6 刘训言;番茄叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因(LeFAD7)的克隆及其在温度逆境下的功能分析[D];山东农业大学;2006年
7 王敬文;水稻ω-3脂肪酸脱氢酶的基因克隆和功能研究[D];复旦大学;2006年
8 李令勇;大豆FAD2基因的克隆及蒺藜苜蓿、大豆P450超基因家族的鉴定[D];南京农业大学;2006年
9 周洲;转脂肪酸去饱和酶基因PtFAD2和PtFAD3银腺杨84K的抗寒性研究[D];中国林业科学研究院;2007年
10 林萍;中间锦鸡儿油酸脱氢酶(FAD2)基因克隆及酵母表达调控的研究[D];中国林业科学研究院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
2 魏雯雯;桃果实冷害相关FAD基因家族的表达调控[D];浙江大学;2011年
3 毛若雨;毛霉Δ6-脂肪酸脱饱和酶基因启动子的克隆和功能鉴定[D];福建师范大学;2010年
4 郭雪洁;衣藻FAB2基因分离和功能鉴定以及不同胁迫条件下表达模式研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
5 刘薇;药用旱生植物刺山柑悬浮培养体系建立及抗逆性初步研究[D];华中科技大学;2009年
6 刘汉梅;玉米抗寒基因的克隆与表达的研究[D];四川农业大学;2004年
7 李啸浪;耐寒相关基因ω3、CBF3、AtGoLS3的分离克隆及ω3转化拟南芥和柱花草[D];华南热带农业大学;2005年
8 刘丽霞;海洋真菌Thraustochytrium sp.FJN-10Δ~4脱饱和酶基因的克隆及表达[D];福建师范大学;2006年
9 郭瑞萍;不同休眠级苜蓿品种抗寒基因克隆与表达差异性研究[D];吉林大学;2007年
10 沈奇;转拟南芥FAD8基因油菜脂肪酸代谢及抗寒性的研究[D];贵州大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘冀红;n-3多不饱和脂肪酸在肿瘤防治中的意义[J];肠外与肠内营养;2004年01期
2 汪灏,黎介寿;ω-3多不饱和脂肪酸对免疫细胞功能的影响[J];肠外与肠内营养;2004年05期
3 袁玉春,刘铜;大豆种子不同部位的脂肪酸组成[J];大豆科学;1998年04期
4 郭美丽,张芝玉,张汉明,苏中武;不同栽培居群红花油中生育酚含量的定量分析[J];第二军医大学学报;1998年01期
5 姜波,关紫烽,范圣第,孙彦辉;葵花籽油脂肪酸含量的气相色谱分析[J];大连民族学院学报;2004年05期
6 咸漠,毕颖丽,李文江,甄开吉;脂肪酸去饱和酶的结构与催化特性研究进展[J];分子催化;2000年06期
7 董娜,林良斌,马占强;农杆菌介导反义油酸脱饱和酶基因转化甘蓝型油菜[J];分子植物育种;2004年05期
8 唐三元;黄骥;张红生;管荣展;;播娘蒿油酸脱氢酶基因(DsFAD6)的克隆和表达分析(英文)[J];分子植物育种;2007年01期
9 石东乔,周奕华,张丽华,刘桂珍,陈正华;农杆菌介导的油菜脂肪酸调控基因工程研究[J];高技术通讯;2001年02期
10 俞建中;马晓磊;潘克厚;杨官品;于文功;;Construction and characterization of a normalized cDNA library of Nannochloropsis oculata(Eustigmatophyceae)[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2010年04期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 熊兴华;甘蓝型油菜高油酸基因工程研究[D];湖南农业大学;2003年
2 胡亚平;油料作物油脂合成相关基因的转录、克隆和功能比较研究[D];中国农业科学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 谢金喜;花生脂肪酸品质改良关键基因FAD2的克隆与特异表达载体构建[D];福建农林大学;2006年
2 刘仁建;红花种子醇溶蛋白及其含油率和脂肪酸分析[D];四川农业大学;2006年
3 徐霞;高油酸花生基因工程育种的研究[D];山东大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 高建强;;花生高油酸种质的研究与利用[J];江西农业学报;2012年09期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 烈文;;花生良种——粤选58[J];今日科技;1983年05期
2 ;一九七八年花生生育期间气象条件分析[J];山东气象;1979年01期
3 荆建国,聂红民;花生化学调控新技术的应用[J];河南科技;1994年04期
4 陈秉忠;有毒花生与肝癌的关系[J];世界科技研究与发展;1994年02期
5 谢宪章,陈建国;用花生饼生产花生晶[J];安徽科技;1995年11期
6 鲍林岐;程谋星;李建德;孙洪玉;石殿义;;岭区旱薄地花生获取高产的七项技术改革[J];科技致富向导;1997年01期
7 吴丽萍,吴祖建;农杆菌介导的遗传转化在花生上的应用及前景[J];福建农业科技;2001年02期
8 潘瑞炽,陈惜吟,罗蕴秀;花生入地结荚原因的研究[J];植物生理与分子生物学学报;1983年02期
9 闵炜;多效唑对花生的生物学效应[J];江西科学;1989年04期
10 马淑琴;小麦间套花生、玉米高效栽培技术[J];河南科技;1997年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 辛英豪;高继明;刘标;李莎莎;姜世金;;Ⅰ型鸭病毒性肝炎VP1基因的克隆与原核表达[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
2 焦石;贾立军;薛书江;刘明明;黄国明;张守发;;牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
3 彭跃跃;丁燏;简纪常;鲁义善;;南极衣藻γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSHI)基因的克隆,原核表达及定量分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 岳亮;王艺磊;张子平;林鹏;邹志华;谢芳靖;陈锦民;冯建军;;日本囊对虾Cathepsin B基因的克隆与原核表达[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 孟先明;潘艳;蔡新斌;陆专灵;梁湘;唐海波;杨剑;张红普;罗廷荣;;狂犬病毒ERA株基质蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
6 赵刚;李刚;范晓娟;;狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
7 李凯;高宏雷;祁小乐;高玉龙;高立;邓小芸;王笑梅;;禽网状内皮组织增生病病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备[A];全球肉鸡产业论坛暨第二届中国白羽肉鸡产业发展大会会刊[C];2010年
8 宋艳;柳学广;朱晓苏;徐丽;司马杨虎;徐世清;;野桑蚕Bmand-Sxl基因的克隆及原核表达[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
9 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
10 刘冠楠;姜建国;;盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的原核表达及酶学性质分析[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王宪超;花生施微肥可增产[N];河南科技报;2002年
2 本报实习记者 张良如;老醋花生“天仙配”[N];健康时报;2004年
3 本报特约专家 季雪飞;糖尿病人能否吃花生?[N];健康时报;2005年
4 刘桂云;花生整粒取油技术[N];江苏科技报;2001年
5 陈贵善;怎样防止花生空壳[N];云南科技报;2003年
6 张蕾;花生地里怎么长出了“鸡蛋”?[N];科技日报;2009年
7 解小如;山东花生栽培技术获国家科技进步奖[N];农资导报;2009年
8 河北省农业厅 李藏朝;管理上水平 效益自然增[N];河北科技报;2009年
9 定州市农牧局 王虎;重茬种花生 种子咋处理[N];河北农民报;2009年
10 王玉堂;花生施钙肥能增产[N];陕西科技报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈立志;牛源致病性坏死梭杆菌分离鉴定及其白细胞毒素免疫特性研究[D];吉林大学;2008年
2 赵宇军;猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因表达及其基因特异性噬菌体展示肽库构建[D];中国农业科学院;2005年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 李静;海洋酵母菌Metschnikowia reukaufii W6b酸性蛋白酶的生产、基因克隆和表达的研究[D];中国海洋大学;2008年
5 游向荣;龙眼成花转变与成花逆转的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
6 许波;抗菌/抗内毒素多肽葛佬素的表达、纯化及其生物活性的初步研究[D];第四军医大学;2004年
7 孙照刚;传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺失该基因病毒的重组[D];中国农业大学;2005年
8 郑银英;苹果茎沟病毒和褪绿叶斑病毒分子变异研究[D];华中农业大学;2005年
9 姜秀云;牛分枝杆菌主要保护性抗原基因的克隆、表达及免疫研究[D];吉林农业大学;2005年
10 黄小波;猪传染性胃肠炎检测基因芯片与猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因表达研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈惠;花生白藜芦醇合酶基因的克隆及原核表达[D];福建师范大学;2004年
2 陈雄艳;人IL-24基因的克隆、表达及活性鉴定[D];苏州大学;2004年
3 赵艳丽;水稻中DNA甲基转移酶的原核表达及功能初步鉴定[D];东北师范大学;2010年
4 丁彪;小鼠IFRG15基因在植入前胚胎及原核表达的研究[D];安徽农业大学;2010年
5 牟静;多头带绦虫四川株六钩蚴Tm45W基因的克隆与原核表达[D];四川农业大学;2010年
6 刘志强;抗Cyclin D1人源胞内单链抗体的原核表达与鉴定[D];吉林大学;2011年
7 王轶;甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达[D];四川大学;2005年
8 张淑华;心肌型脂肪酸结合蛋白的原核表达与应用研究[D];吉林大学;2006年
9 王云珑;拟南芥Athspr突变体的耐热性分析及Athspr基因的原核表达[D];兰州大学;2010年
10 李会娟;家蚕转胶蛋白基因的原核表达及功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
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