收藏本站
《现代医药卫生》 2011年13期
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立

彭韦霞  文芳  曹仁贤  杨慧龄  颜斌  张友其  
【摘要】:目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Cave-olin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用。方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链。通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PolIII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体。用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率。结果:测序结果显示pEN-TRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确。LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统。转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%。结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应。人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础。

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张敏;RNA干扰的研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);2003年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 马红樱;吴伟;;RNA干扰及其应用[J];黄石理工学院学报;2007年04期
2 杨媛;王蒙;粟永萍;;RNAi作用机制研究进展及其应用[J];免疫学杂志;2005年06期
3 吴玉霞;未晓巍;孙靖棣;;RNAi在哺乳动物抗病防御中的应用及研究进展[J];吉林师范大学学报(自然科学版);2010年01期
4 张敏,张新,白春学,陈杰,MinQ. Wei;RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体的表达[J];中华内科杂志;2004年05期
5 张敏,张新,白春学,陈杰,MinQ.Wei;RNA干扰技术抑制A549细胞表皮生长因子受体表达的研究[J];中华肿瘤杂志;2004年12期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 罗健英;MMP9/TIMP1在缺氧滋养细胞中的表达与子痫前期关系的研究[D];华中科技大学;2010年
2 郭慧;RNAi沉默STAT3基因对人喉鳞癌化疗增敏作用的实验研究[D];吉林大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 李军;rAAV2介导的靶向HIF-2α的siRNA增强胰腺癌细胞对健择敏感性的实验研究[D];苏州大学;2009年
2 孟艳;RNA干扰对大鼠肝星状细胞COL1A1基因表达的影响[D];中国医科大学;2009年
3 孙朕;RNA聚合酶Ⅱ识别的启动子表达长dsRNA的RNAi载体的设计与构建[D];河北农业大学;2010年
4 杨媛;ERp29基因在肠上皮细胞辐射损伤修复中的作用研究[D];第三军医大学;2006年
5 黄明德;小干扰RNA抑制c-myc表达对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响[D];苏州大学;2006年
6 胡勤芹;应用RNA干扰技术抑制口蹄疫病毒的基因表达与复制的研究[D];华中农业大学;2006年
7 张巍;siRNA抑制HepG2细胞mcl-1表达及mcl-1体外抗HepG2细胞凋亡作用的研究[D];第四军医大学;2007年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 臧运华;唐明;郭瑞友;叶俊丽;曹晓岚;;含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF的影响[J];中西医结合心脑血管病杂志;2010年02期
2 张淑霞;;奇智方对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响[J];中西医结合心脑血管病杂志;2010年02期
3 吴正思;单秀英;王彪;林菊丽;鲁开化;庄福连;;Ang1、Ang2及Tie2在脐静脉内皮细胞的体外三维培养中的表达及意义[J];中国现代医学杂志;2010年03期
4 张宏伟;方东;任鹏飞;察雪湘;聂雅莉;胡香杰;赵国强;;大鼠VR1基因siRNA表达载体的构建及体内研究[J];中国药理学通报;2010年03期
5 贾明旺;黄文杰;;Caspase-3基因沉默对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞凋亡的影响[J];中国病理生理杂志;2010年01期
6 张清;张玲玲;;人脐静脉内皮细胞体外培养及其相关研究[J];医学综述;2010年03期
7 殷实;;RNA干扰机制在治疗HIV上的应用[J];医学理论与实践;2010年03期
8 张晶;何胜虎;;卡托普利与黄芪注射液对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响[J];医药导报;2010年02期
9 赵雷;张吉凤;赵佳怡;祝金明;李淑梅;;ADMA对人脐静脉内皮细胞粘附功能影响的体外研究[J];中国实验诊断学;2010年02期
10 张敏芳;钱家麒;戴慧莉;倪兆慧;;二十碳五烯酸抑制早期糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1的表达[J];中国病理生理杂志;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 万春鹏;余燕影;曹树稳;;金花茶总皂苷对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用[A];中国化学会第27届学术年会第03分会场摘要集[C];2010年
2 田伟;雷燕;朱凌群;陈可冀;;人参和三七提取物在血管生成信号通路上作用靶点的研究[A];弘扬中华养生文化 共享健康新生活——中华中医药学会养生康复分会第七届学术年会论文集[C];2010年
3 龚韧;陈琦;吴延庆;;热休克蛋白(HSP22)在缺氧/复氧损伤人脐静脉内皮细胞的表达及其与细胞凋亡关系的研究[A];第12届中国南方国际心血管病学术会议专刊[C];2010年
4 张社兵;姜德谦;欧柏青;刘虹;张小炼;徐新;马绍椿;唐良秋;;LOX-1基因沉默抑制氧化低密度脂蛋白诱导HUVECs表达趋化因子Fractalkine[A];第12届中国南方国际心血管病学术会议专刊[C];2010年
5 熊敬维;;Role of tln1 in zebrafish cardiovascular development.[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
6 ;Down regulation of CCR5 by asymmetric siRNA duplex-mediated RNA interference[A];Proceedings of International Symposium on Pharmacogenomics and the Regulation of Drug Metabolism Enzymes and Genes[C];2010年
7 周晓琳;赵永波;吴云成;;GRP78对原代海马神经元OGD/恢复后细胞凋亡的影响[A];第六届国际脑血管病高峰论坛论文集[C];2010年
8 ;Protection of 78KDA Glucose Regulated Protein to Neurons in Endoplasmic Reticulum Stress[A];第六届国际脑血管病高峰论坛论文集[C];2010年
9 ;In Vivo and in Vitro Studies on GRP78's Effect against Neuronal Apoptosis after Ischemia-reperfusion Injury[A];第六届国际脑血管病高峰论坛论文集[C];2010年
10 杨群辉;杨硕;胡建民;杨建成;;siRNA介导的RNAi对心肌细胞半胱亚磺酸脱羧酶基因抑制效果的研究[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 群芳;基因沉默临床研究获成功[N];科学时报;2010年
2 记者 毛黎;美开发出癌症治疗新技术[N];科技日报;2009年
3 张荔子;乳腺癌基因特异性药物曙光初现[N];健康报;2004年
4 余志平;打开功能基因组学与未来治疗学的大门[N];中国医药报;2004年
5 曾崇君;奇尔根核酸业务试水MBO[N];医药经济报;2004年
6 通讯员 钱勇 记者 范又;我国成功重建永生化人脐静脉内皮细胞[N];光明日报;2003年
7 记者姚春雨通讯员钱勇;人脐静脉内皮细胞重建成功[N];健康报;2003年
8 聂翠蓉编译;RNAi:生物技术的蓝月亮[N];科技日报;2003年
9 ;认识我们的基因[N];科技日报;2003年
10 钱勇;永生化人脐静脉内皮细胞重建成功[N];科学时报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张润驹;BK_(Ca)对人子宫内膜容受性的影响及其机制研究[D];浙江大学;2011年
2 开心;B-CLL细胞内BCR相关因子及其信号通路表达与交互关系的研究[D];山东大学;2010年
3 韩璐;豆科植物蒺藜苜蓿发育相关基因[D];山东大学;2010年
4 孙玉;Caveolin-1在氧化应激致肺血管通透性增加中的作用和调控机制[D];山东大学;2010年
5 郭慧;Toll样受体介导角膜真菌感染炎症反应的作用及基因沉寂治疗研究[D];山东大学;2010年
6 刘培;沉默Id-1基因对人口腔癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响[D];山东大学;2010年
7 陈正岗;沉默Id-1基因对腺样囊性癌生物学行为影响的实验研究[D];山东大学;2010年
8 赵锐;血管内皮生长因子调控胃癌及胆管癌侵袭转移作用的实验研究[D];山东大学;2010年
9 牛卫博;整合素αυβ6调控胰腺癌恶性进展的实验研究[D];山东大学;2010年
10 陈世敏;泛素结合酶UbcH10作为大肠癌诊治标志物可行性的实验研究[D];山东大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 喻浴飞;线虫全基因组内源siRNA及其靶点基因预测与功能分析[D];北京交通大学;2011年
2 姜子敬;组蛋白去乙酰化酶Ⅰ族对肿瘤细胞多药耐药性作用的研究[D];华东理工大学;2011年
3 林晓萍;Keap1/Nrf2信号通路在铜绿假单胞菌脂多糖上调气道粘蛋白MUC5AC表达中的作用[D];浙江大学;2011年
4 蔡蓓蕾;半胱氨酰白三烯受体2对大鼠胶质瘤C6细胞分化的调节及其siRNA和拮抗剂筛选[D];浙江大学;2011年
5 唐经励;SiRNA干扰技术稳定下调基因osterix在骨髓基质干细胞中的表达[D];浙江大学;2011年
6 海燕;非小细胞肺癌细胞中Nrf2的调控与生物学功能研究[D];浙江大学;2011年
7 吴清松;B7H1在胰腺癌panc-1细胞的表达及其功能研究[D];浙江大学;2011年
8 刘芳蕾;肺癌PLK1基因多态性及siRNA干预的研究[D];浙江大学;2011年
9 李曼;基于质粒表达的siRNA对猪圆环病毒2型体内外复制的抑制效应[D];河北农业大学;2011年
10 邹俊;Caveolin-1在肝细胞性肝癌中的表达及其意义[D];广西医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026