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《实验血液学杂志》 1997年04期
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多药耐药基因QRT-PCR检测中内标准DNA和RNA模板的构建

曹丽萍  王斌  郁知非  
【摘要】:利用多药耐药基因(MDR1)全基因质粒和分子克隆技术,经二次克隆将戊型肝炎病毒一段238bP的核苷酸序列插入MDR1 308 bp的目的 cDNA片段,构建了插入突变型MDR1-cDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第三次克隆构建了插入突变型MDR1-RNA重组体,最后经体外转录出546 nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。所建立的定量逆转录-多聚酶链反应(QRT-PCR)技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的MDR1 mRNA,为临床MDR1表达的定量检测提供了确实可行的手段。

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