弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

江涛周艳琴刘琴聂浩姚宝安赵俊龙

【摘要】：根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coliDH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入E.coliBL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AJ132530)的同源性达99.6%,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。

【作者单位】：华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
【关键词】： 龚地弓形虫 MIC 基因克隆 表达
【基金】：教育部高等学校博士点科研基金项目(20040504016) 教育部重点科研项目(105120)
【分类号】：S852.72;Q78
【正文快照】：

龚地弓形虫(Toxoplasma gondii)属于专性细胞内寄生原虫,能引起严重的人兽共患弓形虫病(Toxoplasmosis),对免疫功能低下者及孕妇危害尤其严重,常导致器官移植和AIDS病患者致死性损害,造成孕妇流产、畸胎、死胎,以及新生儿脑炎、智力障碍等[1]。动物弓形虫病的传播与流行常给

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	【引证文献】
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前10条

1	;Detection of Antibodies against Toxoplasma gondii by ELISA with Recombinant Microneme Protein 3[J];Animal Husbandry and Feed Science;2009年Z3期
2	江涛;龚大春;陈声国;聂浩;姚宝安;赵俊龙;;几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较[J];安徽农业科学;2007年08期
3	江涛;董秀均;汪长城;;弓形虫微线体蛋白MIC3基因在大肠杆菌内的高效表达研究[J];安徽农业科学;2008年17期
4	江涛;姚宝安;赵俊龙;;重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究[J];安徽农业科学;2009年34期
5	马立安;江涛;张忠明;;拟南芥Ran2基因的原核表达及产物的纯化[J];长江大学学报(自科版)农学卷;2007年01期
6	江涛;董秀均;汪长城;;弓形虫病ELISA诊断抗原保存方法的研究[J];长江大学学报(自然科学版)农学卷;2008年02期
7	余建国;何忠平;;实验动物弓形虫免疫胶体金快速检测方法的建立及试纸制备[J];福建畜牧兽医;2011年03期
8	江涛;赵年彪;韩有元;赵俊龙;;弓形虫MIC3亚单位疫苗的免疫效果观察[J];湖北畜牧兽医;2007年05期
9	江涛;赵年彪;陈声国;赵俊龙;;弓形虫与附红细胞体人工混合感染猪的临床试验[J];湖北畜牧兽医;2007年08期
10	付媛;张雪娟;赵俊龙;何永强;刘恩勇;卢福庄;江涛;冯尚连;;日本血吸虫22.6ku膜相关蛋白基因的克隆及原核表达[J];华中农业大学学报;2007年03期

	【参考文献】
	【参考文献】

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前1条

1	杨慧龄,肖建华,梁瑜,张愉快,刘传爱;弓形虫微线体蛋白1部分基因的克隆、测序及表达[J];中华预防医学杂志;2003年01期

	【共引文献】
	【共引文献】

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前10条

1	谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2	王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3	康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4	安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5	朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6	毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7	单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8	葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9	王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
10	刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期

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前10条

1	王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2	唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集（上册）[C];2007年
3	樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4	商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年（1993—2003）论文集[C];2003年
5	陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
6	王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
7	任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
8	马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
9	马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
10	吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年

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前10条

1	魏朝明;中国螽（虫斯）总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
2	贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
3	姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
4	崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
5	陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
6	刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
7	姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
8	叶纨芝;白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析[D];浙江大学;2001年
9	吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
10	宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年

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前10条

1	曾蕾;中国西北地区血友病B的基因诊断[D];兰州大学;2011年
2	肖衡;基于CUDA的AB非格点蛋白质结构预测的并行化研究[D];武汉科技大学;2011年
3	耿丽;尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因疫苗对小鼠的免疫保护性研究[D];山东大学;2011年
4	武江勇;基于机器人机构学的F_0F_1ATP合成酶马达能量储存研究[D];西南交通大学;2011年
5	刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
6	郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
7	刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
8	陈晓红;小麦金属反应元件结合蛋白cDNA的筛选、克隆与分析[D];首都师范大学;2000年
9	赫英俊;DNA分子标记技术在海带种质鉴定中的应用[D];中国科学院海洋研究所;2000年
10	桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年

	【同被引文献】
	【同被引文献】

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前10条

1	杨丹,叶佩莹,万津,刘永平,马辉文;谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及提纯[J];氨基酸和生物资源;2004年03期
2	吕燕波,万瑛,吴玉章;SARS病毒S蛋白的B细胞表位预测[J];第三军医大学学报;2004年02期
3	梁宏德,李学伍,徐平生;牛抗鸡红细胞、鸡卵清白蛋白高免血清制备及IgG的提取[J];动物医学进展;1999年03期
4	孙双姣,蒋治良;金纳米微粒的制备和表征及其在生化分析中的应用[J];贵金属;2005年03期
5	周永安;弓形虫疫苗及其保护性研究进展[J];国外医学(寄生虫病分册);1998年06期
6	蒋华,何深一;弓形虫疫苗研究新进展[J];国外医学(寄生虫病分册);2004年06期
7	王申锋;郭爱玲;钱明珠;;猪弓形虫病和附红细胞体病混合感染的诊疗[J];中国畜牧兽医;2006年02期
8	周建军,宋玉兰;基因免疫概况和发展[J];国外医学(免疫学分册);1999年03期
9	江涛;何会时;龚大春;陈声国;聂浩;姚宝安;赵俊龙;;血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较[J];湖北农业科学;2007年03期
10	杨建功,娄淑红,张文彬;猪弓形虫并发附红细胞体病的综合防治[J];湖北畜牧兽医;2005年03期

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前2条

1	江涛;猪弓形虫病分子诊断方法的建立与基因免疫研究[D];华中农业大学;2006年
2	方瑞;弓形虫自杀性DNA疫苗及重组杆状病毒疫苗研究[D];华中农业大学;2010年

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前1条

1	王金苹;弓形虫病PCR和ELISA诊断方法的建立和初步应用[D];华中农业大学;2005年

	【二级引证文献】
	【二级引证文献】

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前10条

1	;Diagnosis and Treatment of Swine Toxoplasmosis[J];Animal Husbandry and Feed Science;2010年01期
2	马立安;张忠明;;3种植物Ran基因的克隆及序列分析[J];安徽农业科学;2009年34期
3	郭凯;陈兴智;;弓形虫主要抗原的研究进展[J];蚌埠医学院学报;2012年04期
4	孙秀涛;谢银杰;张思东;沈学文;赵阳;项勋;段纲;邹丰才;;免疫学与分子生物学技术在弓形虫病诊断中的研究进展[J];动物医学进展;2009年07期
5	陈金铃;;刚地弓形虫微线体蛋白3的研究进展[J];中国畜牧兽医;2012年03期
6	马立安;张忠明;;3种植物Ran基因的克隆及序列分析(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年01期
7	马立安;江涛;张忠明;;拟南芥Ran小GTP结合蛋白在细胞有丝分裂中的定位[J];华中农业大学学报;2008年06期
8	周小东;曾照芳;冉华全;;β-苦瓜素的结构分析与表位预测[J];激光杂志;2011年01期
9	白昀;刘茂军;冯志新;白方方;熊祺琰;孔猛;吴叙苏;邵国青;;刚地弓形虫NT株MIC3基因的克隆和原核表达[J];江苏农业学报;2011年06期
10	王占伟;邵国青;陈笑娟;;动物抗血清及其制备技术要点与应用进展[J];江西农业学报;2009年07期

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前1条

1	庄金秋;梅建国;沈志强;;胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

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前3条

1	刘菲;天府肉鹅α干扰素基因克隆、表达及其生物学活性研究[D];四川农业大学;2011年
2	田丽红;虎源猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白的原核表达及应用研究[D];东北林业大学;2010年
3	沈婵娟;鸭瘟病毒UL51基因部分特性及其基因工程蛋白应用的研究[D];四川农业大学;2010年

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前9条

1	张源源;刚地弓形虫微线体蛋白3的高效表达及应用[D];福建师范大学;2010年
2	唐卫杰;鹅α干扰素作为小鹅瘟VP3基因疫苗佐剂的研究[D];四川农业大学;2011年
3	张琼;弓形虫入侵相关蛋白MIC3的定位及DNA疫苗的研究[D];中南大学;2008年
4	卓国荣;犬血清弓形虫IgG抗体快速诊断金标试纸条的研制[D];华中农业大学;2008年
5	苟惠天;弓形虫GJS株微线体蛋白3基因的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2008年
6	付光伟;日本血吸虫表膜结构蛋白Annexin基因克隆、表达与免疫保护效果评估[D];福建农林大学;2009年
7	张燕丽;弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及表达[D];甘肃农业大学;2009年
8	李聪颖;山羊弓形虫病免疫胶体金快速检测试纸条的研制[D];延边大学;2010年
9	胡义彬;隐孢子虫鼠基因型三个核酸疫苗、亚单位疫苗的制备及其免疫保护性研究[D];中国农业科学院;2010年

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前10条

1	李军建;张仁利;傅玉才;耿艺介;黄达娜;胡忠;;弓形虫RH株微线体蛋白MIC3基因的克隆与表达[J];热带医学杂志;2010年10期
2	江涛;张东林;聂浩;姚宝安;赵俊龙;;弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在IBRS-2细胞内的表达[J];畜牧兽医学报;2007年08期
3	;基因诱变、重组、克隆[J];生物技术通报;1993年08期
4	沙莉;苏争先;黄小红;邱君志;关雄;;微生物几丁质酶的分子生物学研究及其应用[J];农业生物技术学报;2003年06期
5	王静敏,魏峰,张西臣,蔡亚男,刘全,吴涛,李建华,尹继刚;柔嫩艾美耳球虫杂交株MIC2基因克隆及序列分析[J];吉林农业大学学报;2005年04期
6	许崇波,王玉炯,许崇利;C型产气荚膜梭菌β_2毒素基因的克隆与表达[J];生物技术;2005年05期
7	陈吉祥,杨慧,颜显辉,钟英斌,张晓华,李筠;致病性哈维氏弧菌溶血素基因克隆及其检测[J];中国水产科学;2005年05期
8	陈选阳;林世强;袁照年;张招娟;郑金贵;;甘薯zds基因的克隆与植物表达载体构建[J];福建农林大学学报(自然科学版);2005年04期
9	李落叶;井金学;;稻瘟病抗性基因的分子定位及克隆[J];中国农学通报;2006年01期
10	杜金友;孟宪强;徐兴友;王同坤;郭学民;;植物耐盐相关基因克隆与基因工程的研究进展(综述)[J];河北科技师范学院学报;2006年01期

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前10条

1	江涛;周艳琴;刘琴;聂浩;姚宝安;赵俊龙;;弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
2	王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3	孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
4	戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
5	朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
6	吕海鹏;史俊南;赵守亮;Athony J．Smith;;人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
7	王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8	方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
9	张志春;张谷丰;罗光华;方继朝;;小菜蛾嗅觉膜原蛋白SNMP1基因的克隆表达[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
10	王翠;李世军;李闯;俸艳萍;彭秀丽;龚炎长;;鸭多巴胺受体1(DRD1)基因克隆与多态性检测[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年

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前10条

1	记者李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
2	刘越西　徐仁元记者金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
3	黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
4	许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
5	王婷婷;我国完成世界首例转基因克隆兔实验[N];科技日报;2007年
6	曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];团结报;2000年
7	王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
8	李建平;首例荧光转基因克隆猪所产猪崽再次被确认具有荧光特征[N];大众科技报;2008年
9	记者王中宙;25只转基因克隆绵羊在内蒙古农业大学诞生[N];呼和浩特日报(汉);2010年
10	吴一福;四军医大构建HBV全基因克隆质粒细胞系[N];中国医药报;2006年

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前10条

1	李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
2	谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
3	邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
4	魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
5	赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
6	郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
7	王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
8	李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
9	段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
10	倪多娇;栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2007年

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前10条

1	鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
2	刘占通;猪α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒活性研究[D];河南农业大学;2005年
3	张怡;重组鼠抗人CD19单链抗体的构建和表达[D];浙江大学;2006年
4	郝敏;玉米与大斑病菌构成的不同互作中基因表达的研究[D];河北农业大学;2006年
5	黄志强;产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆[D];福建农林大学;2006年
6	武鸿;嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究[D];浙江大学;2007年
7	余国武;腊梅脂转移蛋白基因克隆与功能的初步分析[D];西南大学;2007年
8	赵秀振;蓖麻蚕体液胰凝乳蛋白酶抑制剂调查及其基因克隆[D];中国农业科学院;2007年
9	马维;辣椒疫病抗性相关基因的克隆与分析[D];西北农林科技大学;2007年
10	张琳琳;蜡样芽孢杆菌工程菌的构建及α-淀粉酶基因的表达[D];内蒙古农业大学;2007年

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